登革病毒NS1抗原检测技术的初步研究
本文选题：登革病毒 切入点：NS1蛋白 出处：《暨南大学》2010年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】： 目的 通过制备登革病毒NS1蛋白多克隆抗体及单克隆抗体,并研究其特异性,初步建立登革病毒NS1抗原检测技术。 方法 1.在已成功构建的登革病毒NS1蛋白毕赤酵母表达系统的基础上,利用该系统进行NS1蛋白的分泌表达；并免疫BALB/C小鼠,制备多克隆抗体。 2.将获得的多克隆抗体,用ELISA与免疫荧光法,研究其特异性。 3.复苏登革病毒NS1单克隆抗体细胞株,培养扩增,制备腹水抗体,并纯化,用ELISA与免疫荧光法,研究其特异性。 4.以登革病毒NS1单克隆抗体为竞争抗体,采用间接竞争ELISA初步建立了登革病毒NS1抗原检测技术。 结果 1.由转化子Pichia Pastoris-NS 1经过复苏、诱导表达、鉴定和低温真空冻干,成功获得重组表达的NS1蛋白冻干粉。 2.将重组表达的蛋白纯化对BALB/C小鼠进行免疫,经鉴定得到特异性针对NS1的高免血清抗体,ELISA测定多克隆抗体的效价为1：13500。经ELISA与免疫荧光两种方法检测,该多克隆抗体与四型登革病毒有交叉反应,。为下一步进行杂交瘤细胞融合,成功筛选出另外一株抗四型登革病毒单克隆抗体奠定基础 3.成功复苏已有的登革病毒NS1单克隆抗体细胞株,制备出腹水型单克隆抗体,用ELISA与免疫荧光法证明,该单克隆抗体与四型登革病毒有交叉反应。 4.采用间接竞争ELISA法初步建立了登革病毒NSl抗原检测技术。 结论 由转化子Pichia Pastoris-NS1表达的重组蛋白具有较强的免疫原性,成功制备与四型病毒有交叉反应的鼠抗NSl多克隆抗体。登革病毒NSl单克隆抗体,与四型登革病毒有交叉反应。初步建立了登革病毒NSl抗原检测技术。
[Abstract]:Purpose. The polyclonal antibody and monoclonal antibody against dengue virus NS1 protein were prepared and its specificity was studied. The detection technique of dengue virus NS1 antigen was established. Method. 1. On the basis of the successfully constructed Pichia pastoris expression system of dengue virus NS1 protein, the system was used to secrete and express NS1 protein, and the polyclonal antibody was prepared by immunizing BALB/C mice. 2. The specificity of polyclonal antibody was studied by ELISA and immunofluorescence. 3.The resuscitation dengue virus NS1 monoclonal antibody cell line was cultured and amplified, the ascites antibody was prepared and purified, and its specificity was studied by ELISA and immunofluorescence. 4. Using the monoclonal antibody of dengue virus NS1 as the competitive antibody, an indirect competitive ELISA technique was established for the detection of dengue virus NS1 antigen. Results. 1. The recombinant NS1 protein freeze-dried powder was successfully obtained by resuscitation, induction, expression, identification and vacuum freeze-drying of the transformant Pichia Pastoris-NS 1. 2. BALB/C mice were immunized by purification of recombinant protein. The titer of polyclonal antibody was 1: 13500 by Elisa, which was specific to NS1, and was detected by ELISA and immunofluorescence. The polyclonal antibody has cross reaction with dengue virus type IV. It lays the foundation for the further fusion of hybridoma cells and the screening of another monoclonal antibody against dengue virus type IV successfully. 3. After successfully resuscitating the existing NS1 monoclonal antibody cell line, ascites monoclonal antibody was prepared. It was proved by ELISA and immunofluorescence that the monoclonal antibody interacted with dengue virus type IV. 4. The detection technique of dengue virus NSl antigen was established by indirect competitive ELISA method. Conclusion. The recombinant protein expressed by transformant Pichia Pastoris-NS1 has strong immunogenicity. Mouse polyclonal antibody against NSl and NSl monoclonal antibody against dengue virus were successfully prepared. The technique of NSl antigen detection of dengue virus was preliminarily established by cross reaction with type IV dengue virus.
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392.1
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，本文编号：1593369
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