人血浆蛋白C浓缩物的研制

发布时间：2018-03-18 08:42

  本文选题：Cohn氏法组份Ⅳ　切入点：蛋白C　出处：《北京协和医学院》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的探索建立一种串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析从Cohn氏法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。 方法4℃条件下,Cohn氏法组份Ⅳ用磷酸盐缓冲液按1：10(w/v)的比例搅拌抽提5h,离心(6500g,4℃) 40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤,按1：10(w/w)比例加入3.3%的TNBP和11%的Tween-80,缓慢搅拌.6h(24℃)。超滤透析后,再通过串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度；通过Western Blot鉴定蛋白C的特异性；用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量；通过WHO国际标准指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。 结果在有机溶剂/去污剂病毒灭活过程中,0.1mol/L的组氨酸和2.5%的人血清白蛋白能使蛋白C的活性保持在85%以上。纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现一条62kD左右的蛋白带,Western Blot检测显阳性。经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍；固定化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍；经过两步层析后,蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg. 结论组氨酸和人血清白蛋白可以作为有机溶剂／去污剂灭活脂包膜病毒过程中蛋白C的一种很有效的保护剂。串联离子交换层析和固定化金属螯合亲和层析可以从Cohn氏法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物,能显著降低成本,实现血浆的综合利用。
[Abstract]:Objective to establish a series ion exchange chromatography and immobilized metal chelating affinity chromatography for the separation and purification of protein C from component 鈪，

本文编号：1628872