胰腺干细胞的原位传代扩增培养方法及体内移植的初步探讨

发布时间：2018-03-18 21:14

  本文选题：胰腺干细胞　切入点：饲养层　出处：《广西医科大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：优化并稳定胰腺干细胞体外培养条件；比较不同成纤维细胞饲养层对胰腺干细胞扩增培养的效果,探索建立一种能够获得数量较多、富集度较高的胰腺干细胞的体外扩增培养方法；进行昆明小鼠体内移植实验,检测胰腺干细胞体内存活情况。 方法：取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅳ型胶原酶消化,细胞悬液培养和组织块培养,前两天用含10%FBS的DMEM培养液,以后改换无血清DMEM培养液培养；倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性,通过免疫细胞化学染色等技术和方法,检测胰腺干细胞特异性标志-Nestin,对胰腺干细胞进行初步鉴定。采用原位传代扩增培养的方法获得富集度高的胰腺干细胞。将扩增的第二代胰腺干细胞行DAPI和Brdu标记后注入昆明小鼠腿部肌肉及侧脑室,于不同时间点通过免疫组织化学的方法观察其自然存活情况。 结果：体外培养24h,出现典型的成纤维细胞,其密度不断增大,组织块培养1w,细胞悬液培养3-4d后胰腺成纤维细胞密度达到70%～80%时,此时胰腺干细胞逐渐出现,具有活跃的分裂增殖能力,表达特异性标志-巢蛋白(Nestin)。胰腺干细胞可进行多次原位传代扩增培养,富集度提高、保持未分化状态和旺盛的分裂增殖能力。对扩增后的第二代胰腺干细胞行DAPI标记后注入昆明小鼠腿部肌肉,一周后未检测到存活的胰腺干细胞,Brdu标记后的胰腺干细胞注入小鼠侧脑室后3d,检测到存活的胰腺干细胞,1w时逐渐减少,2w时未检测到标记后的胰腺干细胞。 结论：(1)原位传代扩增培养方法可获得富集度较高的胰腺干细胞。 (2)胰腺干细胞可在侧脑室内存活一周。
[Abstract]:Objective: to optimize and stabilize the culture conditions of pancreatic stem cells in vitro, to compare the effects of different fibroblast feeder layers on the proliferation and culture of pancreatic stem cells, and to explore the establishment of a kind of pancreatic stem cells that can be obtained in a large number. The in vitro amplification and culture of pancreatic stem cells with high enrichment were carried out in Kunming mice to detect the survival of pancreatic stem cells in vivo. Methods: the pancreatic tissues of newborn SPF mice were digested with type 鈪，

本文编号：1631333