轮状病毒在KMB17细胞上的适应性培养及免疫原性研究

发布时间：2018-03-19 00:23

本文选题：轮状病毒　切入点：KMB17细胞　出处：《昆明医学院》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 轮状病毒(rotavirus, RV)是引起世界范围内婴幼儿急性腹泻最主要的病原之一,也是造成发展中国家婴幼儿死亡的重要原因,占所有肠道感染病因的50%以上¨。按照内层衣壳蛋白VP-6的组特异性抗原表位不同,可将RV分为A-G7个组,其中A组RV是引起婴幼儿重症腹泻的主要原因。目前尚无治疗RV腹泻的特效药物,口服补液(ORS)治疗的效果也是有限的,特别对重症患儿并不能明显降低其死亡率。因此,世界卫生组织(WHO)认为,研发优质高效安全的RV疫苗是预防、控制RV感染唯一有效的手段。对于任何一种疫苗而言,其安全性和有效性都是疫苗本身最重要的基本要素,在研制疫苗时最大限度地考虑安全性非常重要。影响疫苗安全性的因素很多,其中用于制备疫苗的细胞基质是重要影响因素之一。一般而言,人源性细胞较其他动物源性细胞其安全性要高,但限于多方面的原因,许多疫苗尚不能用人源性细胞制备；但使用人源性细胞取代非人源性细胞制备疫苗是发展方向。轮状病毒疫苗在预防RV感染中发挥了重要作用,但目前国内外RV疫苗主要是在动物源性细胞制备的,用一种人源性细胞来制备RV疫苗是一值得研究的课题。本研究基于这一思路开展了相关探索,我们分别将在Vero细胞上培养的猴轮状病毒P[2]G3株(SA11株)和人轮状病毒P[8]G1株(Wa株)在KMB17细胞(一株用于人用疫苗生产的细胞株)上进行适应培养,各连续传代10代。结果显示,轮状病毒SA11株和Wa株经在KMB17细胞上适应培养后,随着传代代次的增高,细胞病变逐渐增快,病毒感染性滴度呈递增趋势,并稳定在较高水平。用荧光灶法测得SA1l株病毒滴度峰值达到7.751gCCID50／ml,Wa株病毒滴度峰值达到7.331gCCID50／ml。在连续传代的过程中,确定了病毒接种的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.05。电镜下观察可见典型的轮状病毒颗粒；免疫荧光证实了病毒能在KMB17细胞内复制增殖；且两株适应于KMB17细胞的病毒均可在MA104细胞中形成蚀斑。通过RT-PCR分别扩增两株病毒第1代和第10代的VP7基因测序表明,SA11株病毒VP7基因在传代过程中基因序列未发生改变,保持了良好的遗传稳定性；Wa株病毒VP7基因在传代过程中仅发生了一处基因突变,且为无义突变。用在KMB17细胞上适应培养的RV病毒免疫小鼠,经皮下注射和口服两种免疫途径均获得了针对病毒的特异性抗体,其中SA11株经皮下注射获得的抗体滴度达20480±8192,明显高于经口服免疫的抗体滴度(10240±4096),经t检验,P0.05；Wa株经皮下注射获得的抗体滴度为7186±2048,口服免疫获得的抗体滴度为6144±2364,经t检验,P0.05,无显著差异。本研究成功地将两个血清型的轮状病毒SAll株和Wa株适应至KMB17细胞,并获得了较高感染性滴度的子代病毒,用复制的病毒免疫小鼠,经证实具有较好的免疫原性,为日后轮状病毒的大规模制备以及研制一种对人体更为安全的轮状病毒疫苗奠定了重要的基础。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

【参考文献】