重组小鼠IL-33成熟蛋白的原核表达、纯化及活性检测

发布时间：2018-03-19 06:23

  本文选题：白细胞介素　切入点：原核表达　出处：《微生物学免疫学进展》2015年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的为了在大肠埃希菌中表达具有生物学活性的小鼠IL-33成熟蛋白。方法利用PCR技术从pc DNA3.1-IL-33质粒中扩增小鼠IL-33成熟蛋白的基因,将其插入原核表达载体p ET21a(+),构建成p ET21a-m IL-33质粒,转化至大肠埃希菌BL21,筛选出可表达m IL-33的大肠埃希菌工程菌株。经IPTG诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化。结果经SDS-PAGE分析获得纯度高达95%的m IL-33蛋白,相对分子质量18 000。ELISA试验显示m IL-33可以有效的促进肠系膜淋巴细胞产生Th2型细胞因子(IL-5),与未处理组的差异具有显著的统计学意义。结论利用大肠埃希菌表达系统表达了具有生物活性的m IL-33蛋白,为继续开展IL-33在炎症性肠病的免疫治疗研究奠定了基础。
[Abstract]:Objective to express mouse IL-33 mature protein with biological activity in Escherichia coli. Methods the gene of mouse IL-33 mature protein was amplified from PC DNA3.1-IL-33 plasmid by PCR technique and inserted into prokaryotic expression vector pET21a (pET21a) to construct p ET21a-m IL-33 plasmid. Transformed to Escherichia coli BL21, an engineering strain of Escherichia coli expressing m IL-33 was screened. The recombinant strain was induced by IPTG and purified by nickel column affinity chromatography. The purity of m IL-33 protein was as high as 95% by SDS-PAGE analysis. Relative molecular weight 18 000.ELISA test showed that m IL-33 could effectively promote the production of Th2 type cytokine IL-5 in mesenteric lymphocytes, and there was significant difference between the untreated group and the untreated group. Conclusion the expression system of Escherichia coli can be used. Reached the bioactive m IL-33 protein, It lays a foundation for the further study of immunotherapy of IL-33 in inflammatory bowel disease.
【作者单位】： 中国医科大学基础医学院免疫学教研室;辽宁大学生命科学学院;
【基金】：辽宁省科学计划项目(2011415052-1)
【分类号】：R392

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1633186