靶向bFGF与FGFR1Ⅲc结合位点的单克隆抗体制备及其生物学活性研究

发布时间：2018-03-22 07:31

  本文选题：b　切入点：FGF　出处：《免疫学杂志》2015年02期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的针对碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)与成纤维生长因子受体1c(FGFR1Ⅲc)的结合位点,制备鼠抗人b FGF单克隆抗体并研究其生物学活性。方法用重组表达的人b FGF免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏常规融合制备杂交瘤细胞,通过间接和竞争ELISA筛选出与FGFR1Ⅲc有共同结合位点的抗b FGF单抗。制备小鼠腹水并利用Protein G亲和柱纯化腹水单抗,SDSPAGE鉴定纯化产物;间接ELISA测定单抗亚类、亲和常数,竞争ELISA测定抗体IC50;Western blot和免疫荧光对单抗的生物学活性初步鉴定;CCK-8法检测单抗对肺癌细胞株LL/2的增殖抑制活性。结果筛选出了2株稳定表达b FGF抗体的细胞株Mab E12和Mab D9,竞争ELISA测得其IC50分别为1.564和1.96μg/ml,免疫球蛋白分类两者均为Ig G1,间接ELISA测得Mab E12的亲和常数为5.66×108L/mol;Western blot和免疫荧光表明该抗体能与LL/2细胞内天然合成的b FGF相结合,并对其增殖产生了较明显的抑制作用。结论成功建立了1株能特异性识别b FGF-FGFR1Ⅲc合位点的单抗,能有效的中和b FGF对肺癌细胞株LL/2促增殖作用,为研究肿瘤治疗途径奠定了基础。
[Abstract]:Objective to prepare mouse anti-human b FGF monoclonal antibody against the binding site of basic fibroblast growth factor (bFGF) and fibroblast growth factor receptor 1c(FGFR1 鈪，

本文编号：1647649