滤泡辅助性T细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病中作用的研究

发布时间：2018-03-23 04:07

本文选题：实验性变态反应性脑脊髓炎　切入点：滤泡辅助性T细胞　出处：《泸州医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中观察滤泡辅助性T细胞(Tfh)的变化，探讨Tfh细胞与EAE的关系。方法：60只雌性清洁级C57BL/6J小鼠随机分成3组：正常对照组、EAE对照组及甲泼尼龙防治组，每组20只。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）及完全弗氏佐剂制成免疫抗原，皮下注射制作EAE模型。模型建立后第二天起，甲泼尼龙防治组以甲泼尼龙25mg/kg剂量腹腔注射，每日给药1次，连续给药14天。同时，予以EAE对照组、正常对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。记录三组小鼠的发病率、发病潜伏期、进展期及发病高峰期神经功能障碍评分。于免疫诱导后第30天后处死小鼠。留取小鼠脑脊髓组织、动脉血。小鼠脑脊髓组织处理后做HE染色进行病理检查，用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清白细胞介素-21(IL-21)及趋化因子配体13（CXCL13）水平，脑组织使用放射免疫法检测白细胞介素-4(IL-4)及白细胞介素-10(IL-10)含量，通过流式细胞仪测定外周血Tfh细胞占CD4+T细胞比例。结果：（1）C57BL/6J小鼠发病情况：正常对照组小鼠未发病；EAE对照组及甲泼尼龙防治组发病率100％。EAE对照组发病潜伏期12.95±1.28天，甲泼尼龙防治组发病潜伏期16.10±1.29天，甲泼尼龙防治组发病潜伏期比EAE对照组长（P＜0.01）。EAE对照组发病进展期4.70±0.92天，甲泼尼龙防治组进展期为3.00±0.97天，甲泼尼龙防治组发病进展期比EAE对照组缩短（P＜0.01）。EAE对照组神经功能障碍评分为3.60±1.27，甲泼尼龙防治组发病高峰期神经功能障碍评分为2.35±0.88，甲泼尼龙防治组发病高峰期神经功能障碍评分较EAE对照组评分低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。（2）正常对照组、EAE对照组及甲泼尼龙防治组小鼠脑及脊髓病理学改变情况：正常对照组小鼠脑组织无异常。EAE对照组及甲泼尼龙防治组小鼠脑组织实质内血管周围有明显炎性细胞浸润，其中主要为淋巴细胞和少量的单核细胞，典型者形成“袖套”样的改变。甲泼尼龙防治组炎性细胞浸润严重程度与EAE对照组相比病理改变减轻。（3）正常对照组、EAE对照组及甲泼尼龙防治组小鼠外周血中Tfh细胞占CD4+细胞的比例及CXC趋化因子受体5（CXCR5）、可诱导性共刺激因子（ICOS）比例：正常对照组小鼠外周血中CD4+CXCR5+细胞占CD4+细胞的比例为5.00±1.82%， EAE对照组小鼠为25.97±3.14%，甲泼尼龙防治组小鼠为15.15±1.67%。正常对照组小鼠外周血中CD4+ICOS+细胞占CD4+细胞的比例为17.31±1.96%，EAE对照组小鼠为34.91±2.74%，甲泼尼龙防治组小鼠为23.09±2.39%。正常对照组小鼠外周血中Tfh细胞占CD4+细胞的比例为2.81±0.62%， EAE对照组小鼠为8.58±1.27%，甲泼尼龙防治组小鼠为5.70±1.02%。 EAE对照组小鼠外周血中Tfh细胞占CD4+细胞比例、CD4+CXCR5+细胞占CD4+细胞比例、CD4+ICOS+细胞占CD4+细胞比例较正常对照组增高(P＜0.01)；甲泼尼龙防治组小鼠外周血中Tfh细胞占CD4+细胞比例、CD4+CXCR5+细胞占CD4+细胞比例、CD4+ICOS+细胞占CD4+细胞比例较EAE对照组降低(P＜0.01)，，较正常对照组增高(P＜0.01)。（4）正常对照组、EAE对照组及甲泼尼龙防治组小鼠血清IL-21及CXCL13水平：正常对照组小鼠血清IL-21水平为1.62±0.29pg/ml，EAE对照组小鼠为3.47±0.35pg/ml，甲泼尼龙防治组小鼠为2.45±0.27pg/ml。正常对照组小鼠血清CXCL13水平为1.73±0.43pg/ml，EAE对照组小鼠为3.75±0.52pg/ml，甲泼尼龙防治组小鼠为2.64±0.27pg/ml。EAE对照组小鼠血清IL-21及CXCL13水平较正常对照组增高(P＜0.01)；甲泼尼龙防治组血清IL-21及CXCL13水平较EAE对照组降低(P＜0.01)，较正常对照组增高(P＜0.01)。（5）正常对照组、EAE对照组及甲泼尼龙防治组小鼠脑组织中IL-4和IL-10含量的变化：正常对照组脑组织IL-4含量为24.98±2.23pg/ml，EAE对照组脑组织IL-4含量为11.17±2.07pg/ml，甲泼尼龙防治组脑组织IL-4含量为18.48±2.23pg/ml。EAE对照组较正常对照组明显降低（P 0.01）；甲泼尼龙防治组较EAE对照组显著升高,较正常对照组降低（P 0.01）。正常对照组脑组织IL-10含量为2.60±0.17pg/ml，EAE对照组脑组织IL-10含量为1.14±0.13pg/ml，甲泼尼龙防治组脑组织IL-10含量为2.05±0.15pg/ml。EAE对照组较正常对照组明显降低（P 0.01）；甲泼尼龙防治组较EAE对照组显著升高,较正常对照组降低（P 0.01）。（6）相关性分析：正常对照组、EAE对照组及甲泼尼龙防治组脑组织中IL-4、IL-10含量与Tfh细胞占CD4+细胞比例呈负相关，(P0.01)；IL-21、CXCL13水平与Tfh细胞占CD4+细胞比例呈正相关(P0.01)。EAE对照组及甲泼尼龙防治组Tfh细胞及IL-21、CXCL13的表达与潜伏期呈负相关((P0.01)，与进展期、神经功能障碍评分呈正相关((P0.01)。脑组织IL-10含量与EAE对照组及甲泼尼龙防治组潜伏期呈正相关（(P0.01），与进展期、神经功能障碍评分呈负相关（(P0.01）。结论：1.本实验以MOG35-55作为免疫诱导原诱导C57BL/6小鼠制作EAE模型，EAE小鼠神经功能障碍明显，中枢神经系统血管周围炎性细胞浸润、脱髓鞘改变明显，说明本法造模成功。2.EAE对照组小鼠脑组织中IL-4、IL-10含量较正常对照组明显降低，IL-4、IL-10含量与Tfh细胞占CD4+细胞比例呈负相关、与EAE小鼠发病潜伏期、进展期和神经功能障碍评分密切相关，说明IL-4和IL-10在EAE发病起着抑制作用。3.EAE对照组小鼠体内Tfh及IL-21、CXCL13的水平较正常对照组明显增加，且与发病潜伏期、进展期和神经功能障碍评分密切相关，说明Tfh细胞的异常增高参与了EAE发病。4.甲泼尼龙对EAE小鼠发病具有防治作用，其机制可能通过抑制Tfh细胞比例及IL-21、CXCL13水平的异常增高和促进IL-4和IL-10的产生而发挥对EAE的防治作用。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R744.51

【参考文献】