Tiam1在早孕小鼠子宫内膜的表达及功能研究

发布时间：2018-03-23 11:20

本文选题：Tiam1　切入点：胚泡植入　出处：《重庆医科大学》2009年硕士论文

【摘要】： 背景: 生殖现象是生物界最普遍和最根本的特征之一,胚胎着床是人类和哺乳动物生殖过程中妊娠建立的第一步,也是决定妊娠成功与否的关键。成功的植入取决于的子宫内膜容受状态的建立和具有侵入性的胚泡的生长的同步化。子宫内膜仅在某一特定时期允许胚胎着床,这一时期时间很短,代表着子宫内膜对胚胎具有容受性,称为“着床窗口期”。胚胎着床过程包括胚泡的定位、识别、结合、黏附、侵入并被包埋到子宫内膜几个阶段[1] [2][3]。该过程涉及到众多基因的调控以及错综复杂的调节因子的参与,早期的胚胎发育和着床的详细分子机制尚未完全清楚。自1829年提出肿瘤胚胎性起源概念以来,胚泡着床与肿瘤侵袭性转移之间相似的生物学行为[4][5]就越来越受到重视,原癌基因及肿瘤抑制基因也成为了胚泡着床机制研究的热点。Tiam1 (T-lymphoma invasion and metastasis inducing protein 1,T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1)参与肿瘤发生的多个过程,比如:肿瘤细胞迁移、黏附、侵袭,基质蛋白水解,细胞骨架的再塑形、细胞形态的转变和细胞内信号传导等,而这些过程对胚泡着床也是至关重要的[6] [7][8]。本研究旨在检测Tiam1在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨Tiam1对小鼠胚胎着床的影响。我们用FQ-PCR和免疫组织化学的方法和Western Blot试验分别检测未孕小鼠及早孕2、3、4、5、6、7天子宫内膜Tiam1基因和蛋白的表达规律。小鼠子宫角于孕4天早晨注射Tiam1抗体后,在孕9天观察胚泡着床数及其对着床的影响。FQ-PCR结果显示妊娠小鼠子宫内膜组织Tiam1 mRNA的表达明显高于未妊娠小鼠,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增强的趋势,在妊娠第五天达到最高峰(mean±SD, p0.05)。免疫组化分析显示Tiam1蛋白在小鼠子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。Western Blot实验结果显示Tiam1蛋白表达的整体趋势是随着孕日的推移表达量逐渐增高,孕5天达到最高峰,从孕6天和孕7天开始逐渐降低。子宫角注射Tiam1多克隆抗体后与正常对照组比较,胚泡着床数明显减少(mean±SD, p0.05)。因此,我们推测Tiam1可能对小鼠胚泡着床起着重要的调控作用。目的:研究原癌基因Tiam1在小鼠子宫内膜表达的规律性变化及其对胚泡植入的影响,初步探讨它在小鼠胚胎着床过程中的作用。方法: 1.收集未孕和早孕2、3、4、5、6、7天小鼠子宫内膜,共7组进行Tiam1表达规律的实验,每个实验中均为7个组,每组小鼠的样本量为20只。 (1)运用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术测定Tiam1 mRNA的表达规律; (2)免疫组织化学SP法检测未孕和早孕小鼠子宫内膜中Tiam1蛋白的表达情况,并进行定位分析; (3)运用Western Blot试验对未孕和早孕小鼠子宫内膜中Tiam1蛋白的表达进行定量的分析; 2.孕鼠80只进行Tiam11功能研究。于孕4天上午8AM-9AM小鼠子宫角分别注射抗Tiam1抗体和生理盐水,于孕9天观察着床胚泡数并与正常对照组进行对比,分析Tiam1蛋白对胚泡植入的影响。结果: 1. FQ-PCR:未孕和早孕小鼠的子宫内膜均有Tiam1 mRNA表达,早孕小鼠子宫内膜组织Tiam1mRNA的表达高于未孕小鼠子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现表达逐渐增强的趋势,到妊娠第5天达到最高; 2.免疫组织化学: Tiam1蛋白在早孕小鼠子宫内膜广泛表达,随着孕日的推移,其表达部位也呈现不同的变化,在孕3-5天主要存在于腔上皮,孕4天至孕6天主要存在于腺上皮,而在基质细胞的表达呈现出随孕日增加逐渐增加,且在孕5天(着床窗口期)达到最高。 3. Western Blot: Tiam1蛋白表达的整体趋势是随着孕日的增加表达量逐渐增高,孕5天达到最高峰,从孕6天、孕7开始逐渐降低。 4.于着床前的孕4天8AM-9AM子宫角注射抗Tiam1抗体,于孕9天观察胚泡着床数,结果显示注射抗Tiam1抗体后胚泡着床数明显减少,差异显著(p0.05)。结论: Tiam1 mRNA和蛋白在孕1-5天逐渐增加并在着床窗口期达到最高峰,且Tiam1蛋白在孕2、3天即着床前在腔上皮明显增加,我们推测Tiam1可能通过重组肌动蛋白骨架、形成和维持紧密连接及增加以E 钙粘素为基础的黏附连接来调控着胚泡的移动、定位和黏附。Tiam1蛋白围绕着床窗在腺上皮细胞的高表达可能与胚泡植入时调控腺体的分泌有关。Tiam1蛋白表达在孕四天的基质细胞显著增高、在孕五天即着床窗达到最高峰且在孕六天仍保持着高的水平,这些结果可能建议Tiam1可能在胚泡植入的侵袭期间n 入了滋养层的侵袭及细胞外基质的降解。用抗Tiam1抗体在小鼠胚泡着床前的子宫角注射,进而阻断其生理功能,发现胚泡着床数明显减少,推测其很可能在胚泡着床中扮演重要的角色。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R321

【参考文献】