旋毛虫与宿主肠粘膜上皮细胞相互作用蛋白的筛选

发布时间：2018-03-23 17:45

  本文选题：旋毛虫　切入点：肠道感染性第一期幼虫　出处：《吉林大学》2009年硕士论文

【摘要】： 本研究为筛选旋毛虫与宿主肠粘膜上皮细胞相互作用蛋白，首先通过实验的方法确定收集旋毛虫肠道感染性第一期幼虫的最佳时间为经口灌服感染性第一期幼虫后6h。进而用Trizol试剂提取旋毛虫肠道感染性第一期幼虫总RNA，以纯化的肠道感染性第一期幼虫mRNA为模板反转录合成cDNA，将其两端加上EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端后连接到T7 Select 103b载体，包装蛋白包装后，对构建好的文库进行扩增。最后利用胶原酶消化法，分离新生仔猪肠粘膜上皮细胞，并进行大量的体外培养。以分离到的新生仔猪肠粘膜上皮细胞为靶标，利用全细胞筛选法对构建的旋毛虫肠道感染性第一期幼虫T7噬菌体展示cDNA文库进行筛选。 本研究首次成功构建了旋毛虫肠道感染性第一期幼虫T7噬菌体展示cDNA文库，，文库的库容量为6.0×10 5 Pfu，扩增后的文库滴度为1.9×10 12 Pfu/mL，重组率为98%，95%的插入片段在2502000bp之间；通过改进的胶原酶消化法成功的分离得到了新生仔猪肠粘膜上皮细胞，并对其进行了大量的体外培养；首次以全细胞筛选法成功的筛选到了旋毛虫与宿主肠粘膜上皮细胞相互作用蛋白，命名为IECTsp。I ECTsp基因的成功筛选为研究旋毛虫与宿主间信号转导以及旋毛虫侵入机体的机制奠定了基础。
[Abstract]:In order to screen the interaction proteins between Trichinella spiralis and intestinal mucosal epithelial cells, The best time to collect the first stage larvae of Trichinella spiralis is 6 h after oral administration of the first stage larvae, and then the total RNAs of the first stage larvae of intestinal infections of Trichinella spiralis are extracted by Trizol reagent. The purified mRNA of the first stage of intestinal infective larvae was synthesized by reverse transcription. EcoR 鈪

本文编号：1654515