离子霉素对Jurkat T细胞增殖的抑制作用及其机制初探

发布时间：2018-04-16 02:04

  本文选题：离子霉素 + Jurkat　； 参考：《暨南大学》2009年硕士论文

【摘要】： 目的:通过研究离子霉素(Ionomycin)对Jurkat T细胞的增殖、细胞周期、活化、凋亡以及ERK1/2、磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,P-ERK1/2)的影响,探讨离子霉素对Jurkat T细胞增殖调控中的作用。[方法]:MTT法检测离子霉素在不同时间点对Jurkat T细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜下观察不同浓度离子霉素及不同细胞增殖抑制剂对Jurkat T细胞集落形成的影响;MTT法检测不同浓度离子霉素对Jurkat T细胞增殖的影响;MTT法比较不同信号通路特异性阻断剂LY294002、AG490、GF109203X、Genistein、PD98059和离子霉素对Jurkat T细胞增殖的影响;碘化丙锭(propidiumiodide,PI)染色并结合流式细胞术分析比较离子霉素与其他细胞增殖抑制剂对Jurkat T细胞周期变化的影响;流式细胞术分析不同浓度离子霉素对Jurkat T细胞凋亡的影响;不同浓度离子霉素处理Jurkat T细胞,CD69-FITC、CD25-FITC、CD3-PE荧光标记单克隆抗体染色,流式细胞术分析不同浓度离子霉素对Jurkat T细胞表面活化标志CD69、CD25的影响;通过ELISA检测经不同浓度离子霉素处理的Jurkat T细胞上清中转化生长因子β(TGF-β)的表达水平;通过Western Blot检测不同时间下离子霉素对Jurkat T细胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达的影响及不同离子霉素对Jurkat T细胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达的影响并与PD98059比较,分析离子霉素在影响Jurkat T细胞增殖中的作用及与ERK1/2信号通路之间的关系;激光共聚焦显微镜观察不同浓度离子霉素对Jurkat T细胞胞内Ca~(2+)的影响;激光共聚焦显微镜观察不同浓度离子霉素对Jurkat T细胞胞内pH的影响。[结果]:离子霉素对JurkatT细胞增殖的抑制作用在48h后效果最明显(P＜0.01);随着离子霉素浓度从0.1 mg/L逐渐增至4.0 mg/L,Jurkat T细胞的增殖逐渐减弱,以4.0 mg/L离子霉素的抑制作用最为明显(r=0.95,P＜0.01),且该浓度下,离子霉素对Jurkat T细胞增殖的抑制作用较PD98059、AG490、GF109203X和Genistein明显(P＜0.05);离子霉素在浓度为0.1～8 mg/L时,可抑制Jurkat T细胞的集落形成;离子霉素可使Jurkat T细胞周期停滞于G0/G1期,阻止其进入S期并可促进Jurkat T细胞的凋亡;离子霉素对Jurkat T细胞的表面活化标志CD69的表达几乎无影响,可轻微抑制CD25的表达;离子霉素可抑制Jurkat T细胞上清中TGF-β的表达,且与离子霉素的浓度有关;离子霉素在浓度为0.1～4 mg/L时,可使Jurkat T细胞胞内Ca~(2+)释放出来(P＜0.01),且胞内pH升高(P＜0.01);离子霉素在1h时可显著抑制Jurkat T细胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达。[结论]:离子霉素对Jurkat T细胞增殖有明显的抑制作用并影响其集落形成,可使Jurkat T细胞周期停滞于G0/G1期,阻止其进入S期,且对Jurkat T细胞凋亡有显著促进作用,对Jurkat T细胞的表面活化标志CD69无显著影响,可轻微抑制CD25的表达;可抑制细胞上清中TGF-β的表达水平;可以显著影响Jurkat T细胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白的表达,这些发现可为肿瘤疾病的治疗和新的抗肿瘤药物的开发提供新的靶点。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of ionomycin on the proliferation of T cells by MTT assay . The effects of different concentrations of ionomycin on the proliferation of T cells were investigated by MTT assay . The effects of different concentrations of ionomycin on the proliferation of T cells were investigated by MTT assay . The results showed that the inhibitory effect of ionomycin on the proliferation of T cells increased from 0.1 mg / L to 4.0 mg / L ( P < 0 . 05 ) . Conclusion : The effect of ionomycin on the proliferation of T cells and its colony formation can arrest the cell cycle arrest in G0 / G1 phase , prevent it from entering the S phase , and inhibit the expression level of TGF - 尾 .

【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

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