LAIR家族的表达及其对LPS诱导DC产生促炎因子的调节作用

发布时间：2018-04-25 12:33

  本文选题：LAIR-1 + LAIR-2　； 参考：《第四军医大学》2008年博士论文

【摘要】： 白细胞相关免疫球蛋白样受体(Leukocyte associated immunoglobulinlike-receptor,LAIR)属于免疫球蛋白超家族成员。它是1983年用大颗粒淋巴细胞免疫小鼠,制备对NK细胞杀伤有抑制作用的抗体时发现的。人LAIR家族包含LAIR-1和LAIR-2两个成员。在第八届人类白细胞分化抗原会议上分别被命名为CD305及CD306。人LAIR基因位于人19号染色体(19q13.42)上被称为白细胞免疫球蛋白样受体复合体(Leukocyte Ig-likereceptor complex,LRC)中。LAIR-1和LAIR-2基因转录方向相反。LAIR-1cDNA全长1728bp,有4个不同的异型。人LAIR-1是一个含有287个氨基酸的Ⅰ型跨膜糖蛋白,胞膜外区有一个Ig样结构域,胞浆区含有两个免疫受体酪氨酸抑制性模体(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs,ITIMs)。LAIR-2基因编码的蛋白质与LAIR-1胞膜外区有近84%的同源性,含有135个氨基酸,没有跨膜区和胞质区结构域,为一种分泌蛋白,LAIR-2有3个不同的异型。编码小鼠LAIR-1(mLAIR-1)的基因位于小鼠7号染色体的最末端,相当于人的LRC所处的19q13.42区域。人LAIR-1与LAIR-2有相似的表达特点,主要表达于造血细胞。用抗体交联人LAIR-1,其胞浆区可募集酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2,转导抑制性信号,抑制细胞功能。小鼠LAIR-1与人LAIR-1有相似的结构特征,在氨基酸水平有40%的同源性。它也广泛表达于各种免疫细胞,介导抑制性功能。特异性抗体交联小鼠LAIR-1,胞浆区ITIM被磷酸化后可募集SHP-2,但不募集SHP-1。 2006年,Mayaard研究小组首次发现了胶原是人LAIR-1的功能性高亲和力配体。它们之间的相互作用依赖于保守的甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸的胶原重复序列。最近,他们又在体外实验中发现LAIR-2与LAIR-1有相同的胶原结合位点,LAIR-2能够以高亲和力结合胶原,并可阻断LAIR-1与胶原的结合。小鼠LAIR-1可以高亲和力结合多种型别的胶原分子,同样,mLAIR-1与配体的相互作用也依赖于保守的甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸的胶原重复序列。 LAIR-1与胶原之间的相互作用可受到可溶型分子的调控。sLAIR-1及LAIR-2分子可以阻断膜型LAIR-1与膜型或细胞外基质中的胶原分子结合。而且LAIR-2与胶原的亲和力要远远大于sLAIR-1与胶原结合的亲和力,因此,在体内LAIR-2很可能作为人膜型LAIR-1受体的竞争分子,从而调节LAIR-1的抑制活性。 本研究中首先构建了pIg%q3C-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2真核表达载体,转染CHO细胞,经克隆化筛选建立了稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长分子的细胞株。利用Protein A亲和层析柱及LAIR-2单克隆抗体交联的亲和层析柱,从细胞培养上清中分别纯化到LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长分子。为夹心ELISA检测人标本准备了标准品蛋白。利用流式细胞术及免疫细胞化学技术鉴定了表达的LAIR-2蛋白分子与原核表达LAIR-2抗原制备的单克隆抗体具有良好的结合活性。 应用优化的ELISA试剂盒,发现炎症病人的血清中可溶型LAIR分子水平高于正常人。孕妇的血清和尿中LAIR-2水平以及尿中的sLAIR-1水平高于对照组。对比实验发现,sLAIR-1和LAIR-2之间以及LAIR分子在血清中及尿中的水平都呈正相关。利用免疫组织化学技术,我们用LAIR-1-Fc融合蛋白及LAIR-2-Fc融合蛋白在胎盘组织切片中进行了染色,发现LAIR-2以高亲力结合胎盘组织基底膜,提示LAIR-2与sLAIR-1一起可能通过与膜型LAIR-1竞争相同的配体来调节LAIR-1的免疫抑制功能。 应用免疫组织化学及激光共聚焦显微镜技术,我们研究了非造血组织中LAIR-1的表达。发现LAIR-1在中枢神经系统有选择性表达,而且在中枢神经系统中LAIR-1与小胶质细胞标志分子共表达于同一种细胞,同时发现在神经胶质瘤组织中,小胶质细胞的LAIR-1表达水平明显增高。 Toll样受体是参与固有免疫应答抵抗病原微生物并诱导适应性免疫应答的重要分子。TLR4是识别细菌LPS,介导抗菌炎症反应的重要分子。它高表达于单核/巨噬细胞、肥大细胞、中性粒细胞以及肠道上皮细胞、内皮细胞等。过高水平的LPS在体内可诱导严重的炎症反应,甚至发生败血症性休克。目前,对于TLR4介导的信号转导以及生理病理反应的调节作用十分关注。为了弄清共表达于单核巨噬细胞表面的LAIR-1与TLR4在功能上的相互关系,我们对LAIR-1调节LPS诱导DC细胞产生促炎细胞因子进行了研究。我们首先制备了3株大鼠抗小鼠LAIR-1单克隆抗体并进行了初步鉴定,发现3株抗体中的FMU-mLAIR-1.2可以用于Western blot、流式细胞术分析及免疫细胞化学研究。进一步实验中发现用固相化的FMU-mLAIR-1.2抗体交联小鼠树突状细胞系DC2.4细胞表面的LAIR-1分子可引起IL-6和TNF-α等促炎细胞因子分泌水平增加。我们提出的设想是:LAIR-1交联后募集的酪氨酸磷酸酶可能抑制了某种可抑制TLR4信号转导的信号分子的活性;或者是促进了TLR4信号通路中的某个分子,从而促进了促炎细胞因子的分泌。
[Abstract]:LAIR - 1 and LAIR - 2 genes were named CD305 and CD306 . The human LAIR family was named CD305 and CD306 . The human LAIR - 1 was a type 鈪，

本文编号：1801349