plcln蛋白的检测和分布研究

发布时间：2018-04-27 23:39

  本文选题：pICln + ELISA　； 参考：《吉林大学》2008年硕士论文

【摘要】： pICln是1992年Paulmichl从猪肾脏上皮细胞株中(MDCK:madin-darby canine kidney cell line)发现并克隆的一种新蛋白分子。细胞体积调节作用是细胞的重要功能之一,持续的细胞肿胀或收缩会使细胞功能失调导致细胞死亡,pICln是一种调节肿胀细胞体积的“候选”蛋白,其具体的结构及确切的功能尚未明了。为探讨其功能作用,对此进行了以下实验: 一.抗pICln肽段抗体的制备及鉴定 以MDCK细胞pICln蛋白碳端19肽氨基酸残基顺序(NH2-EVDTTPTVAGQFEDADVDH-COOH)所合成的肽段为抗原,以PVP为其载体来处理抗原,通过免疫实验动物制备了抗pICln的肽段抗体,并对其纯化和鉴定,为pICln的实验研究提供了必要的工具。 二.多种组织细胞pICln的检测 在蛋白水平上,用抗pICln的肽段抗体经Western Blot随机检测了多种细胞和组织,结果表明它们均有pICln的表达,且呈约40kDa的蛋白带。pICln在组织和细胞中的广泛表达,提示它在动物及人体胞内可能具有重要的功能。 三. LLC-PK1细胞内pICln的定位分布和渗透性研究 进行了LLC-PK1细胞pICln在等渗和低渗条件下分布的检测,经免疫组织化学染色和Western Blot检测显示,pICln在这些细胞内主要定位于细胞可溶性胞质内。在低渗溶液中观测到在LLC-PK1细胞内的pICln分布发生了明显的变化,这表明了pICln对低渗的敏感性。
[Abstract]:pICln is a new protein molecule found and cloned from the porcine kidney epithelial cell line ( MDCK : madin - darby canine kidney cell line ) in 1992 . Cell volume regulation is one of the important functions of the cell , and the persistent cell swelling or contraction can lead to cell death , and pICln is a " candidate " protein that regulates the volume of swelling cells .


Preparation and identification of anti - pICln peptide fragment antibody


The peptide fragment synthesized by the amino acid residue sequence ( NH2 - EVDTTPTVAGQFEDADVDH - COOH ) of MDCK cell pICln ( NH _ 2 - EVDTTPTVAGQFEDADVDH - COOH ) was used as the antigen . The anti - pICln - resistant peptide fragment antibody was prepared by using PVP as its carrier , and purified and identified . The necessary tools were provided for the experimental study of pICln .


II . Detection of multiple tissue cells pICln


At the level of protein , a variety of cells and tissues were randomly detected with anti - pICln - resistant peptide fragment antibody by Western Blot . The results showed that they both had the expression of pICln and a protein band of about 40 kDa . The wide expression of pICln in tissues and cells suggested that it might have important functions in animals and human cells .


III . Localization and permeability of pICln in LLC - PK1 cells


The distribution of pICln in LLC - PK1 cells under isosmotic and hypotonic conditions was carried out . By immunohistochemistry and Western Blot analysis , pICln was mainly localized in the soluble cytoplasm of cells . The distribution of pICln in LLC - PK1 cells was significantly changed in hypotonic solution , indicating that pICln was sensitive to hypotonic .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R341

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