外源性BDE-209对小鼠体外受精早期胚胎发育及精子DNA损伤的影响

发布时间：2018-05-15 01:10

  本文选题：十溴联苯醚 + 体外受精　； 参考：《暨南大学》2010年硕士论文

【摘要】： 第一部分外源性BDE-209暴露对小鼠体外受精受精率及早期胚胎发育的影响 【目的】 本研究在外源性BDE-209可降低卵母细胞存活率的基础上,采用用昆明小鼠体外受精、早期胚胎发育的方法,拟初步探讨BDE-209对小鼠体外受精率的影响及小鼠早期胚胎发育的毒性作用,并探究其剂量效应关系。 【方法】 将体外受精培养液按照BDE-209的终浓度不同设为四组：对照组A 0μg／ml；B组：10μg／ml；C组：20μg／ml；D组：40μg／ml。取性成熟昆明雌鼠20只及雄鼠8只,对雌鼠行促排卵及促卵成熟,收集成熟卵母细胞随机平均放入以上培养液中,对雄性小鼠附睾尾取精,加入培养液中,使其受精。放入37℃,5%CO2培养箱中培养。观察指标：小鼠受精后6小时倒置显微镜下观察卵细胞第二极体形成情况,此后根据小鼠体内受精卵的发育与运行规律,每隔24小时观察一次。统计各组2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚及囊胚形成率,并观察其形态变化。 [结果] 1、在2细胞阶段：对照组A组2细胞成形率为69.2%；BDE-209低剂量组B组为63.3%；中剂量组C组为28.1%；高剂量组D组为24.1%。B组的受精率稍低于A组,但差异无统计学意义(χ2=0.750,P=0.387)；C组与A组相比,明显低于对照组,差异有统计学意义(χ2=30.478,P0.001)；D组与A组相比,低于对照组,差异有统计学意义(χ2=36.29,P0.001)。 2、4-细胞、8细胞、桑葚胚及囊胚形成率,实验各组均低于对照组,差异有显著统计学意义。 3、B组与A组比较,除二细胞期外,B组胚胎各期发育率均低于A组。B组VS A组,①4-细胞期,χ2=4.927,P=0.026；②8细胞、桑葚胚及囊胚形成率,(P0.001)。 4、C组与B组比较,C组胚胎各期发育率均低于B组(P0.01)。 5、D组与C组比较,除2-细胞期外,D组胚胎各期发育率均低于C组(P0.01)。 【结论】 1、外源性低剂量(10μg／ml)的BDE-209对小鼠的受精率无明显影响,但是中高剂量(20μg／ml、40μg／ml)的BDE-209均可明显降低小鼠体外受精的受精率。 2、各浓度的外源性BDE-209均能显著阻滞小鼠受精卵的正常发育。 3、由结果3、4、5可以看出,外源性BDE-209对小鼠受精卵胚胎的发育毒性作用呈现出剂量-效应关系。 综上,通过本实验,阐明外源性的BDE-209对昆明小鼠受精率及受精卵的发育确有毒性,其具体损伤机制及损伤途径有待深入探讨与证实,可根据卵细胞及精子的发育代谢原理有针对性地行进一步研究。 第二部分外源性BDE-209急性染毒对小鼠附睾尾精子DNA的损伤 【目的】 本研究在第一部分研究的基础上,对BDE-209降低昆明小鼠受精率,阻滞受精卵发育的损伤机制及损伤途径进行进一步的研究,以期找出BDE-209的毒性机制。本实验对附睾尾精子行外源性染毒的,采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测BDE-209染毒小鼠精子DNA的损伤,以此探讨BDE-209的毒性作用机制。 【方法】 1、附睾尾取精法体外获得昆明小鼠精子,分别添加到HTF培养基中。按照培养基中BDE-209终浓度的不同将实验分为5组：A组0μg／ml；B组：2.5μg／ml；C组：5μg／ml；D组：10μg／ml；E组：20μg／ml。将各组加入了精子的培养基放入37℃、5%CO2培养箱中,处理时间为2.5小时。 2、精子的单细胞凝胶电泳染毒完毕后,将个样本按照铺胶、裂解、去除核RNA和核蛋白、解旋、电泳、中和、染色等步骤进行单细胞凝胶电泳。最后在荧光显微镜下观察并拍照。 3、统计：每组实验重复3次,每次每组计数70个细胞,每组共计200个细胞,利用彗星分析软件对细胞进行逐个分析,选取细胞尾长、尾头光强、尾部%DNA,Olive尾矩、尾长／头长、迁移率等几个客观指标进行统计分析。 【结果】 1、BDE-209对小鼠精子DNA损伤SCGE试验距离及强度指标的影响 在SCGE试验图片中,正常对照组可见细胞核清晰,大部分细胞呈圆形,边界清楚,密度均匀,拖尾细胞很少,平均尾长为1.15±1.27μm。随着BDE-209染毒剂量的加大,在10μg／ml及20μg／ml浓度时,可见到部分细胞拖尾,平均尾长分别为2.13±1.29μm和2.83.±2.46μm。细胞尾部DNA的含量比也明显增加。经χ2检验,10μg／ml及20μg／ml剂量组细胞尾长、尾部%DNA与对照组相比,差异均有显著的统计学意义(P0.01)。实验组的尾长、尾光强度及尾%DNA与正常组相比,经F检验,其差异也存在统计学意义(P0.01)。 2、BDE-209对小鼠精子DNA损伤SCGE试验相对比指标的改变 此部分结果为相对比,更加能够说明问题。结果显示：Olive尾矩,对照组为0.270±0.322,10μg／ml及20μg／ml剂量组分别是0.453±0.375和0.808±0.822。尾长／头长,对照组为0.045±0.049,5μg／ml、10μg／ml及20μg／ml剂量组均高于对照组。经χ2检验,10μg／ml及20μg／ml向剂量组在Olive尾矩、尾长／头长和对照组相比,差异具有显著的统计学意义(P0.01),5μg／ml组在尾长／头长与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。 3、小鼠精子DNA损伤中各指标变化与BDE-209浓度的相关性分析。 在结果选取的6个指标中,除迁移率外,其他五个指标,经过Person相关分析,相关系数均大于0.9。 【结论】 1、外源性的BDE-209造成小鼠精子DNA的损伤,导致小鼠精子DNA链的断裂。 2、外源性BDE-209致小鼠精子DNA链断裂的损伤作用呈剂量-效应关系。
[Abstract]:Effects of exogenous BDE - 209 exposure on fertilization rate and early embryo development in mice



Purpose of the project



The effect of BDE - 209 on in vitro fertilization rate of mice and the toxicity of BDE - 209 on in vitro fertilization rate in mice and its dose - effect relationship were investigated .



Methodology



In vitro fertilization , the final concentration of BDE - 209 was set to four groups : control group A 0 渭g / ml ;
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本文编号：1890288