乙型脑炎病毒与树突状细胞的互作研究

发布时间：2018-07-17 03:47

【摘要】：乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)感染引起的一种危害严重的人兽共患虫媒传染病。该病是危害我国养猪业的重大繁殖障碍性疫病之一。同时,它还对人类健康造成巨大威胁,是人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一。但长期以来,该病的致病和免疫机理尚不太清楚,临床中针对该病原的快速检测方法也很缺乏。因此,开展JEV与免疫细胞的互作机制和快速检测方法研究,对于揭示该病毒的致病与免疫机理、新型疫苗开发和临床快速检测具有重要科学和实践意义。本论文主要围绕JEV树突状细胞(Dendritic cells, DCs)载体疫苗、JEV强、弱毒株与小鼠DCs互作、JEV胶体金快速检测方法等三个方面展开研究,具体内容如下： 1.JEV树突状细胞载体疫苗研究利用灭活的JEV P3株体外刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(bmDCs),制备DC疫苗并免疫BALB/c小鼠,并于二次免疫后3周使用强毒攻击。结果显示：虽然DC疫苗免疫后诱导的JEV中和抗体低于灭活疫苗,但其诱导的IFN-γ和TNF-α水平却显著高于灭活疫苗,而且显著提升抗原特异性CD8+T细胞水平。攻毒保护性试验表明：尽管DC疫苗的保护效力略低于灭活疫苗(100%),但仍然能提供90%的保护。本研究首次表明JEV负载的DC疫苗可诱导机体产生较高的细胞免疫水平,并能提供有效的免疫保护力,是一种具有潜在应用前景的新型细胞疫苗。 2.JEV强毒株(P3株)与小鼠树突状细胞的相互作用研究本研究通过探讨DC感染JEV P3株后的表型功能的变化,来揭示JEV强毒感染与机体免疫逃逸机制之间的关系。RT-PCR、Realtime-PCR、Western blot、空斑实验、混合淋巴细胞反应(MLR)、ELISpot和流式细胞检测结果表明：JEV强毒株可感染DC,并可在DC中复制,JEV P3株感染不仅抑制DC的MHCⅡ、CD40、CD80和CD86等免疫共刺激分子和抗原提呈相关分子的表达,显著降低DC刺激淋巴细胞增殖和抗原提呈能力,而且还可促进T调节细胞的分化。该研究结果显示：JEV强毒株感染抑制DC的成熟,并降低其抗原提呈能力,导致机体的免疫抑制。本研究从病毒与DC互作的角度揭示了JEV强毒株一种可能的免疫逃避机制,并为解析JEV强毒株的致病机理提供重要线索。 3.JEV疫苗株(SA14-14-2)与小鼠树突状细胞的相互作用研究本研究通过研究DC感染JEV疫苗株后表型功能的变化,从而探讨疫苗株接种诱导机体强大的抗病毒免疫的内在机制。结果表明：JEV SA14-14-2株也可以感染并可在DC中复制,但是JEV SA14-14-2株感染不仅促进DC表面的免疫共刺激分子和抗原提呈相关分子的表达,而且还可显著增强DC刺激淋巴细胞增殖和抗原提呈能力,抑制T调节细胞的分化。说明：疫苗株可以促进DC成熟,增强DC抗原提呈能力并诱导免疫激活。本研究首次从疫苗毒与DC互作的角度揭示了JEV疫苗株感染引发强大的免疫激活效应的一种可能机制,并为揭示JEV疫苗株的免疫保护机理提供科学依据。 4.检测JEV的胶体金方法的建立本研究制备了JEV E蛋白的单克隆抗体,并利用其中两株单克隆抗体建立了针对JEV的胶体金快速检测方法。特异性试验结果显示,该方法与伪狂犬病毒(PRV)、繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、口蹄疫病毒(FMDV)和禽流感病毒(AIV)均无交叉反应。同时,用该方法对临床188份送检病料进行检测,结果表明：该方法与RT-PCR检测结果的特异性和敏感性分别为99.3%和85.7%。说明：本研究建立检测方法可以作为一种新型检测方法用于JEV的临床快速检测。
[Abstract]:Japanese encephalitis ( JE ) ( JE ) ( JE ) is one of the most serious infectious diseases caused by Japanese encephalitis virus ( JEV ) infection .

1 . Study on JEV Dendritic Cell Vector Vaccine

The results showed that although the protective efficacy of DC vaccine was slightly lower than that of inactivated vaccine ( 100 % ) , the induction of IFN - 纬 and TNF - 伪 was significantly higher than that of inactivated vaccine ( 100 % ) .

Interaction between JEV virulent strain ( P3 strain ) and mouse dendritic cells

The results of RT - PCR , Realtime - PCR , Western blot , plaque assay , mixed lymphocyte reaction ( MLR ) , pot and flow cytometry showed that JEV virulent strain could infect DC , and could also promote the differentiation of T - regulated cells .

3 . Interaction of JEV Vaccine Strain ( SA14 - 14 - 2 ) with Dendritic Cells in Mice

The results showed that JEV SA14 - 14 - 2 strain can promote DC maturation , enhance DC antigen presentation ability and induce immune activation .

4 . Establishment of colloidal gold method for detection of JEV

A monoclonal antibody against JEV E protein was prepared and two monoclonal antibodies were used to establish a method for rapid detection of JEV . The results showed that the method was not cross - reactive with PRV , FMDV and Avian Influenza Virus . The results showed that the specificity and sensitivity of this method were 99 . 3 % and 85.7 % , respectively .
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

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