联合激动Toll样受体的树突细胞对表达CEA肠癌治疗作用的实验研究

发布时间：2018-07-25 14:10

【摘要】： 目的: 比较联合激动Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)的树突细胞(dendritic cell.DC)和常规培养的树突细胞在功能上的区别,并通过体外试验比较两者作为肿瘤疫苗对表达CEA肠癌的治疗作用。 材料与方法: 本课题使用人CEA转基因小鼠和转染人CEA的MC38小鼠肠癌细胞株MC38-CEA作为动物模型。将体外培养的DC分为联合激动TLR组和常规组,通过检测DC表面重要标志物、DC分泌IL-12量及DC对淋巴细胞的促增殖作用,比较两者在激活细胞免疫方面功能的区别。另外,在DC上荷载小鼠MHCⅠ类分子限制性表位CEA_(526-533),制备CEA特异性DC肿瘤疫苗,在体外进行细胞毒试验,初步研究其对MC38-CEA的治疗作用。 结果: 1联合TLR组DC重要表面标志物的表达普遍高于常规组DC。 2联合TLR组DC的IL-12分泌量显著高于常规组DC。(P＜0.001) 3联合TLR组DC对淋巴细胞的促增值作用显著强于常规组DC(P＜0.05)。 4联合TLR组DC作为DC疫苗免疫小鼠后获得的效应细胞对MC38-CEA肠癌细胞在较高效应细胞:靶细胞(E:T)比值时具有一定的杀伤作用并显著优于常规组(P＜0.05)。对荷载CEA_(526-533)的MC38-CEA肠癌细胞,联合TLR组和常规组都具有高效的特异性杀伤作用,其中在较低E:T值时联合TLR组的杀伤作用显著高于常规组(P＜0.05)。 结论: 1联合TLR组DC与常规组DC相比,具有更理想的成熟度,并能更有效激活细胞免疫反应,提示联合激动TLR可能增强DC肿瘤疫苗的抗肿瘤效应。 2使用联合激动TLR的DC制备CEA特异性DC肿瘤疫苗,在体外试验中对MC38-CEA小鼠肠癌细胞株具有一定杀伤作用且是CEA特异性的,而常规DC疫苗无明显杀伤作用,但还须进行体内试验进一步验证治疗效果。
[Abstract]:Aim: to compare the functional differences between dendritic cells (dendritic cell.DC) combined with Toll-like receptor (dendritic cell.DC) and dendritic cells (DC) cultured in vitro, and to compare their therapeutic effects on the expression of CEA in colorectal cancer as tumor vaccine in vitro. Materials and methods: human CEA transgenic mice and MC38 mouse intestinal cancer cell line MC38-CEA transfected with human CEA were used as animal models. The DC cultured in vitro was divided into two groups: the combined TLR group and the routine group. By detecting the amount of IL-12 secreted by DC and the effect of DC on the proliferation of lymphocytes, the difference of the function of DC in activating cellular immunity was compared. In addition, CEA specific DC tumor vaccine was prepared by loading mouse MHC class I restricted epitope CEA _ (526-533) on DC. The cytotoxicity test was carried out in vitro to study the therapeutic effect of CEA _ (526-533) on MC38-CEA. Results: 1 the expression of important surface markers of DC in combined TLR group was generally higher than that in DC2 combined with TLR group, and the IL-12 secretion in DC was significantly higher than that in conventional group DC. (P < 0.001) 3 combined with TLR. The effect of DC group on lymphocyte proliferation was significantly stronger than that of normal group (DC (P < 0. 05). (4) combined with TLR group DC was used to immunize mice with MC38-CEA intestinal cancer cells in higher effector cells: target cells (E: t) The ratio had a certain killing effect and was significantly better than the routine group (P < 0.05). MC38-CEA intestinal cancer cells loaded with CEA526-533 had highly specific killing effects in both the combined TLR group and the conventional group. The killing effect of the combined TLR group was significantly higher than that of the conventional group at a lower E: t value (P < 0. 05). Conclusion: (1) compared with conventional TLR group, DC in combination with TLR has more ideal maturity and more effective activation of cellular immune response. It is suggested that the combined stimulation of TLR may enhance the antitumor effect of DC tumor vaccine. 2 the DC combined with agitated TLR can be used to prepare CEA specific DC tumor vaccine. In vitro test, the MC38-CEA mouse intestinal cancer cell line has a certain killing effect and is CEA specific, but the conventional DC vaccine has no obvious killing effect, but the in vivo test must be carried out to further verify the therapeutic effect.
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

【共引文献】

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本文编号：2144065