多巴胺受体在T淋巴细胞中的表达及其在介导T细胞功能调节中的作用

发布时间：2018-08-04 08:39

【摘要】： 目的:随着神经-内分泌-免疫相互作用研究的不断深入,目前已知在淋巴细胞上具有α-和β-肾上腺素受体,并且它们都参与调节免疫细胞功能。然而,尽管已有文献报道淋巴细胞上也存在多巴胺(dopamine, DA)受体,但关于T淋巴细胞上存在哪种亚型DA受体,以及这些受体在介导T细胞功能调节中的作用尚不十分清楚。因此,本研究旨在一方面提供T淋巴细胞表达DA两类亚型受体 D1-like受体(包括D1和D5受体)和D2-like受体(包括D2、D3、D4受体)的证据,另一方面探讨D1-like受体和D2-like受体在介导T细胞功能调节中的作用及其信号转导分子,从而为神经-内分泌-免疫调节网络增加新内容。方法:取小鼠肠系膜淋巴结细胞,用尼龙毛柱粘附法分离和纯化T淋巴细胞,应用流式细胞术检测T细胞的纯度。用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测T淋巴细胞的各种亚型DA受体mRNA表达。淋巴细胞用各种浓度的D1-like受体激动剂、拮抗剂或D2-like受体激动剂、拮抗剂孵育48 h,然后应用噻唑兰(methyl-thiazole-tetrazolium, MTT)比色法检测淋巴细胞对有丝分裂原刀豆蛋白A(concanavalin A, Con A)诱导的增殖反应;应用流式蛋白分析系统测定经Con A刺激的淋巴细胞培养物的上清液中细胞因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)和白介素-4(interleukin-4,IL-4)的浓度;应用125I-环一磷酸腺苷(125I-cAMP)放射免疫法检测淋巴细胞内环一磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量。结果:肠系膜淋巴结细胞经分离和纯化后,获得的CD3+淋巴细胞(即T淋巴细胞)在肠系膜淋巴结细胞中的百分比为93.8±0.53%,明显高于未经分离和纯化的肠系膜淋巴结细胞中的T细胞百分比74.1±0.95%,说明用上述方法已获得纯化的T淋巴细胞。T淋巴细胞可表达所有DA亚型受体mRNA,包括D1-like受体的D1和D5受体,及D2-like受体的D2、D3、D4受体。淋巴细胞分别用5个浓度的D1-like受体激动剂SKF38393(10-9～10-5 M)处理后,细胞对Con A诱导的增殖反应均没有发生明显的改变。用Con A刺激的淋巴细胞经SKF38393(10-8 M)处理后,IFN-γ的产生显著低于未经SKF38393处理的淋巴细胞,但TNF和IL-4的产生没有明显改变。D1-like受体拮抗剂SCH23390(10-7 M)能阻断激动剂SKF38393(10-8 M)对淋巴细胞产生IFN-γ的抑制作用。D1-like受体激动剂、拮抗剂或激动剂与拮抗剂一起处理淋巴细胞,均没有明显影响淋巴细胞内cAMP的含量。上述结果说明,D1-like受体在介导T细胞功能调节中不起主导作用。然而,淋巴细胞分别用5个浓度的D2-like受体激动剂quinpirole(10-9～10-5 M)处理后,细胞对Con A诱导的增殖反应均明显减弱。用不同浓度的D2-like受体拮抗剂haloperidol(10-10～10-7 M)与激动剂quinpirole(10-8 M或10-7 M)一起处理淋巴细胞,haloperidol呈现浓度依赖性地阻断quinpirole对T细胞增殖的抑制作用。quinpirole(10-8 M)可抑制Con A刺激的T细胞生成IFN-γ和TNF,但促进T细胞生成IL-4。haloperidol(10-7 M)能阻断quinpirole抑制T细胞生成IFN-γ和TNF的作用,及阻断quinpirole促进T细胞生成IL-4的作用。上述结果充分说明D2-like受体介导调节T细胞的功能。此外,quinpirole(10-8 M和10-7 M)可导致Con A激活的T细胞内cAMP含量明显减少,haloperidol(10-8 M和10-7 M)则可阻断quinpirole减少淋巴细胞内cAMP的作用,提示cAMP参与D2-like受体介导的T淋巴细胞功能调节。结论:T淋巴细胞能表达各种DA亚型受体 D1、D5受体(即D1-like受体)及D2、D3、D4受体(即D2-like受体)。在D1-like和D2-like两型DA受体中,D2-like受体是介导T淋巴细胞功能调节的主要受体,它的激活能抑制T淋巴细胞的增殖、减少细胞因子IFN-γ和TNF的生成及增加IL-4的生成,D2-like受体的这些作用经淋巴细胞内第二信使cAMP介导。
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【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

【共引文献】