结核分枝杆菌16kD-CFP10-19kD融合蛋白的构建表达及纯化

发布时间：2018-08-09 15:56

【摘要】：目的构建结核分枝杆菌(MTB)16k D-CFP10-19k D融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中对蛋白进行表达并经过纯化获得16k D-CFP10-19k D融合蛋白。方法利用聚合酶链式反应(PCR)方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板扩增16k D、CFP10及19k D基因,经过限制性内切酶处理并依次与p ET28a载体连接,构建p ET28a-16k D-CFP10-19k D重组质粒,转化至大肠杆菌表达株BL21中,在IPTG及低温诱导下获得目标蛋白,镍柱层析获得纯化蛋白。结果经过酶切及测序鉴定验证p ET28a-16k D-CFP10-19k D重组质粒构建正确,原核表达获得可溶性目标蛋白并对其初步纯化。结论成功构建表达并纯化获得16k D-CFP10-19k D融合蛋白,为开发新的结核病特异性诊断抗原研究奠定基础。
[Abstract]:Objective to construct (MTB) 16k D-CFP10-19k D fusion protein expression vector of Mycobacterium tuberculosis and express the fusion protein in Escherichia coli and obtain 16k D-CFP10-19k D fusion protein. Methods 16kD CFP10 and 19kD genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) using the H37Rv genome of Mycobacterium tuberculosis as template. The recombinant plasmid of p ET28a-16k D-CFP10-19k D was constructed by restriction endonuclease treatment and sequentially ligated with p ET28a vector. The target protein was obtained by IPTG and low temperature induction, and the purified protein was obtained by nickel column chromatography. Results the recombinant plasmid of p ET28a-16k D-CFP10-19k D was constructed correctly by restriction endonuclease digestion and sequencing. The soluble target protein was obtained by prokaryotic expression and purified. Conclusion 16k D-CFP10-19k D fusion protein was successfully constructed and purified, which laid a foundation for the development of new TB specific diagnostic antigen.
【作者单位】： 沈阳市第四人民医院儿科;沈阳万类生物科技有限公司;
【分类号】：R378.911

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