兔骨髓栓来源的间充质干细胞的分离培养及其生物学特性的研究

发布时间：2018-09-07 18:11

【摘要】：目的:兔是再生医学领域应用最为广泛的实验动物之一,但目前大规模培养兔间充质干细胞却面临着收获细胞数量少和纯净度低等难题。本研究旨在建立一种培养骨髓栓而获得大量的具有更高增殖活性和自我更新能力的间充质干细胞的方法。方法:骨髓栓法采用被胶原酶消化过的骨髓栓进行培养,骨髓细胞法用骨髓细胞直接贴壁培养以获得间充质干细胞;在光学显微镜下观察两种细胞的形态;以流式细胞术检测两种间充质干细胞的免疫表型;对获得的两种间充质干细胞进行成骨和成脂肪诱导分化,并观察其分化能力;采用CCK-8法检测两种细胞的增殖能力;以成纤维细胞集落单位形成实验检测其自我更新能力;分别对第1,2,3,4代收获的间充质干细胞进行计数,比较两种方法收获的细胞数量。结果:两种间充质干细胞的形态均为成纤维细胞样;流式细胞术表型分析发现,骨髓栓来源的间充质干细胞中CD45阳性造血细胞比例显著降低(P0.05);多向诱导分化实验结果显示,骨髓栓来源的间充质干细胞具有良好的成骨和成脂肪分化能力;CCK-8实验和成纤维细胞集落单位形成实验结果显示,骨髓栓来源的间充质干细胞具有更强的增殖活性和集落形成能力(P0.05);细胞计数显示,骨髓栓法获得的间充质干细胞数量显著多于骨髓细胞法(P0.05)。结论:骨髓栓培养法获得的间充质干细胞纯净度和数量均优于以往的方法,相关发现将为开展再生医学研究提供帮助。
[Abstract]:Objective: rabbit is one of the most widely used experimental animals in the field of regenerative medicine. The aim of this study was to establish a method for obtaining large numbers of mesenchymal stem cells (MSCs) with higher proliferative activity and self-renewal. Methods: bone marrow embolus was cultured with collagenase digested bone marrow suppository, bone marrow cells were directly adhered to bone marrow cells to obtain mesenchymal stem cells, the morphology of two kinds of cells were observed under optical microscope. The immunophenotypes of the two mesenchymal stem cells were detected by flow cytometry, the osteogenesis and adipogenic differentiation of the two mesenchymal stem cells were observed, and the proliferative ability of the two kinds of mesenchymal stem cells was detected by CCK-8 method. The self-renewal ability of fibroblast colony forming unit was tested, and the number of mesenchymal stem cells harvested in the 1st 2nd and 3rd generation were counted, and the number of the cells harvested by the two methods was compared. Results: the morphology of the two kinds of mesenchymal stem cells was fibroblast-like, and the percentage of CD45 positive hematopoietic cells in mesenchymal stem cells derived from bone marrow embolus was significantly decreased (P0.05). Mesenchymal stem cells derived from bone marrow suppositories have good osteogenic and adipogenic ability. The results of CCK-8 test and fibroblast colony formation assay showed that mesenchymal stem cells (MSCs) had good osteogenic and adipogenic ability. Mesenchymal stem cells derived from bone marrow embolism had stronger proliferative activity and colony forming ability (P0.05); the number of mesenchymal stem cells obtained by bone marrow embolus method was significantly higher than that by bone marrow cell method (P0.05). Conclusion: the purity and quantity of mesenchymal stem cells obtained by bone marrow embolus culture are superior to those of previous methods, and the related findings will be helpful for the research of regenerative medicine.
【作者单位】： 中国人民解放军总医院骨科运动医学中心;军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室;
【基金】：国家自然科学基金青年项目(81101342),国家自然科学基金面上项目(81371945,31070996,31171084) 北京市自然科学基金面上项目(7132133)
【分类号】：R329.28

【参考文献】

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【共引文献】

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