重组人粒细胞刺激因子纯化工艺的研究

发布时间：2018-10-19 09:37

【摘要】： rhG-CSF是通过大肠杆菌发酵培养,以分泌型表达生产的重组人粒细胞刺激因子,可以刺激多种造血干细胞的增殖和分化,主要用于各种原因引起的粒细胞减少症。 为了获得高纯度、有活性的rhG-CSF,我们摸索并建立了以细菌破碎和蛋白质盐析、G-25脱盐、CM-Sepharose层析和Sephacryl S-100 H.R层析组成的rhG-CSF纯化工艺流程: 1、细菌破碎和碎片分离:在低温条件下反复冻融,低温高速离心(8000rpm ,4℃)去除细菌碎片; 2、蛋白质盐析:在裂解上清液中加入高浓度中性盐,使蛋白质沉淀; 3、G-25脱盐:采用分子筛层析除去高浓度的中性盐; 4、CM -Sepharose层析:采用了以浓度为0.5M和0.7M的洗脱缓冲液分别洗脱杂蛋白和rhG-CSF; 5、Sephacryl S-100 H.R层析:利用分子量的差别进行最后的精纯。 我们发现,将层析过程中涉及的缓冲液pH值降至4.0,可显著抑制rhG-CSF的降解,并获得纯度大于95%具有生物学活性的rhG-CSF。 利用等线速度原理, rhG-CSF与CM -Sepharose介质解离所需的离子强度范围较广的特点,通过调整rhG-CSF洗脱液浓度,我们将纯化工艺逐步放大至生产规模。 采用上述工艺,我们能够生产出充分满足临床需求的、合格rhG-CSF。
[Abstract]:RhG-CSF is a recombinant human granulocyte stimulating factor expressed in secretory form through E. coli fermentation. It can stimulate the proliferation and differentiation of various hematopoietic stem cells and is mainly used for granulocytopenia caused by various causes. In order to achieve high purity, We fumbled and established a rhG-CSF purification process consisting of bacterial breakup and protein salting-out, G-25 desalination, CM-Sepharose chromatography and Sephacryl S-100 H.R chromatography: 1, bacterial fragmentation and fragment separation: freezing and thawing at low temperature. Low temperature and high speed centrifugation (8000rpm, 4 鈩，

本文编号：2280755