马血清致敏条件下鸡酒精性股骨头坏死动物模型的制作与观察

发布时间：2018-10-24 14:38

【摘要】： 背景和目的: 长期大量饮酒可以引起股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH),已经证实酒精中毒是ONFH的一个确定病因。制作理想的动物模型,可以为深入研究酒精性ONFH的发病机制和防治措施提供良好的载体。1998年王义生等首次报道采用灌胃法成功制成兔酒精性ONFH的动物模型,此后多位学者进行了相关的实验研究,证明灌胃法模拟人类饮酒,制成的动物模型组织学变化符合人类ONFH早期病理特征,是酒精性ONFH动物模型较好的造模方法。但是兔、鼠等四肢动物的负重特点与人类不同,且造模周期较长。为了解决这些问题,我们在马血清致敏条件下,采用灌胃法成功制作出鸡酒精性ONFH动物模型,具有类似人类双下肢负重、造模周期短、成功率高等特点。材料和方法: 取64只健康成年雄性三黄鸡(河南省实验动物中心提供)随机分为4组,每组16只。A组(马血清+酒精组):给予马血清(美国GIBICO公司)10ml/kg静脉注射2次,间隔2周,从第2次给予马血清2周后次日开始采用灌胃法给予烈性白酒(含乙醇46%)10ml/kg·d;B组(单纯酒精组):与A组同步同法给予等量白酒;C组(单纯马血清组):与A组同步同法给予等量马血清;D组(空白对照组):不给予马血清或酒精。C、D组与A组同步同法给予生理盐水(N·S)10ml/kg·d灌胃。于灌胃第4、8周末分批处死,取股骨头制作常规和冰冻切片,分别行HE和苏丹Ⅲ染色,光镜观察组织学变化并测算最大脂肪细胞平均直径、骨小梁面积分数、空骨陷窝计数、股骨头坏死发生率等指标。于灌胃第8周末,各组分别取2只动物股骨头制作标本,扫描电镜观察组织学变化。结果: 1.一般状况:实验动物无1例死亡。注射马血清后,动物一般状况无明显变化。灌洒4周,A、B组动物食欲差,体重下降,毛发光泽差,精神状态稍差,灌酒8周,A、B组动物食欲差,体重明显下降,毛发无光泽,精神状态差,C、D组一般状况好,与实验前无明显变化。 2.肝脏:灌胃第4周术,各组肝脏大体和光镜下均无明显变化。灌胃第8周末,A组肝脏增大,质脆,呈淡黄色,切面有滑腻感,光镜检查,肝细胞内出现脂肪空泡,以小叶中央区受累最为明显,脂肪染色可见小叶中央区遍布桔红色脂肪颗粒;B组动物肝脏有类似改变,但变化程度较之A组轻微;C、D组动物肝脏为暗红色,质软,光镜检查无变化。 3.股骨头:大体观察:灌胃第4周末,各组动物股骨头大体形态、质地无明显变化。灌胃第8周末,各组动物股骨头大体形态无明显变化,A组股骨头较其它各组松脆,易于凿切。光镜检查:灌胃第4周末:各组股骨头组织未见明显病理改变,仅A组中少部分动物出现软骨下骨髓内造血组织减少。灌胃第8周末:病理改变明显,主要集中在股骨头软骨下区。A组HE染色可见骨髓内造血组织明显减少,骨小梁明显变细、稀疏,多处断裂,结构紊乱,空骨陷窝明显增多,脂肪染色见软骨下骨的骨细胞内充满桔红色的脂质,脂肪细胞增殖肥大,脂肪堆积明显。B组中有2只动物见到股骨头软骨下骨髓内造血组织减少,脂肪组织增多,其中1只可见少部分骨小梁骨小梁变细、稀疏、断裂,空骨陷窝增多。C组中有2只动物股骨头内可见骨髓内造血组织减少,脂肪组织增多。D组未见到这些异常变化。A组骨小梁面积分数(32.2±2.58)%减少、空骨陷窝计数(21.60±2.12)%增加、最大脂肪细胞平均直径(47.22±2.79)μm增大,与其它3组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。 4.骨坏死发生率:灌胃第4周末,各组骨坏死率均为0。灌胃第8周末,A组有7只发生骨坏死(7/8,其中双侧的5只,一侧的2只,1级、2级比例为3/9),占87.5%;B组有2只发生骨坏死(2/8,均为单侧,1、2级各一),占25%;C组有2只发生骨坏死(2/8,均为单侧1级),占25%;D组无发生骨坏死者。A组与其它3组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。 5.扫描电镜检查:灌胃第8周末,A组股骨头表面可见凹陷,伴有多处裂痕,剖面可见骨小梁失去原有形态,变细、稀疏,多处断裂,空骨陷窝增多,而B、C、D组未见到这些变化。小结: 1.马血清致敏条件下,采用灌胃法成功制作出鸡酒精性ONFH动物模型,具有造模周期短、成功率高等特点。 2.鸡可以作为酒精性ONFH的研究对象,具有类似人类双下肢负重的特点。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R-332;R681.8

【参考文献】