重组卡介苗rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv2608与rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv3620c的免疫原性

发布时间：2018-10-24 17:54

【摘要】：结核病(Tuberculosis, TB)是一种古老而漫长的感染性疾病,是长期危害人类健康的严重疾病之一。目前,全球大约有三分之一的人口感染了结核杆菌,每年约有300万人死于结核病,平均每天死亡超过8000人。近年来,由于HIV和结核分枝杆菌双重感染,以及耐药结核分枝杆菌的流行,导致结核病的发病率和死亡率大幅度上升,形势更加严峻。联合国已将结核病列为21世纪重点控制的三大疾病之一。卡介苗(BCG)作为唯一的能够预防结核病的疫苗,虽然已在全球广泛使用,但近期发现其保护效果不稳定(0-80%),对成人几乎无效,对已感染患者更是没有治疗作用,因此研制新型的抗结核疫苗刻不容缓。预防性疫苗和治疗性疫苗是新型抗结核疫苗的两个主要发展策略,其中预防性疫苗研究得较多,包括DNA疫苗、蛋自疫苗、重组BCG疫苗、营养缺陷型疫苗、病毒载体疫苗等。本实验针对重组BCG进行研究,通过将一些重要的结核杆菌抗原基因导入BCG,让BCG大量表达保护性抗原,以期诱导比BCG强大而又持久的免疫保护力。 Ag85B和ESAT-6作为重要的抗结核保护性抗原已得到各国科学家公认,研究表明重组入Ag85B-EAST6的BCG (rBCG::Ag85B-EAST6)提高了抗结核保护作用。此外,重组多价抗原疫苗往往能够比单一抗原疫苗激发更强的免疫反应,因此本实验在选择了保护性抗原Ag85B-EAST6融合抗原的基础上又选择了另外两种保护性抗原,PPE蛋白Rv2608(PPE42)和Esx家族成员Rv3620c (EsxW),分别与Ag85B-ESAT6融合抗原联合,以大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒pMV261为载体,构建了两株重组BCG菌株rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv2608与rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv3620c,均为国内外首次报道。将两株重组BCG和传统BCG疫苗分别免疫C57BL/6小鼠,通过ELISA检测了抗体IgG水平IgG2b/IgG1水平和细胞因子(IFN-γ、 IL-2、IL-10等)分泌水平,用ELISPOT检测了TNF-α阳性淋巴细胞水平,并用流式细胞仪检测了CD4+T细胞亚群和CD8+T细胞亚群水平,分析比较各菌株的免疫原性。结果表明,与传统BCG相比较,两株重组BCG均可增强小鼠脾淋巴细胞在特异性抗原Ag85B和PPD刺激下细胞因子TNF-α和IL-2分泌水平,降低细胞因子IL-10分泌水平,显示出更强的细胞免疫应答。同时,与传统BCG相比较,rBCG::Ag85B-ESAT6-Rv3620c诱导小鼠脾淋巴细胞产生更多的细胞因子IFN-γ,进一步增强Thl型细胞免疫反应。流式检测结果表明,两株重组BCG均可引起小鼠脾淋巴细胞特异性抗原Ag85B和PPD刺激下CD4+T细胞亚群和CD8+T细胞亚群分化水平提高,而CD4/CD8比值减小,显示重组BCG能通过增强细胞毒作用提高机体的抗结核免疫保护作用。此外,两株重组BCG均可引起抗原Ag85B特异性的体液免疫反应,与传统BCG相比较,表现为Ag85B特异性IgG水平的升高,并测得IgG2b/IgG1水平也升高,显示Thl型免疫应答增强,与细胞免疫反应结果一致。因此,初步研究表明这两株重组BCG有望开发成为有效的新型抗结核疫苗用于结核病的预防,为进一步的动物保护实验等奠定了基础。
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【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

【参考文献】