干细胞分泌上清的制备及抗氧化和抗皮肤光老化活性研究

发布时间：2018-10-31 06:56

【摘要】： 目的： 1.收集并制备人脐带间充质干细胞无血清培养上清(USFM)。 2.研究USFM对体外培养的人真皮成纤维细胞(HDF)因紫外损伤的保护作用和对小鼠皮肤因紫外辐照损伤的抗光老化作用。方法： 1.从人脐带中分离培养脐带间充质干细胞(UC-MSCs),传代培养,收集干细胞分泌无血清上清,制备USFM. 2.建立UVA损伤HDF损伤模型。MTT法检测USFM对HDF细胞生长作用及增殖作用浓度。 3.室内紫外照射建立昆明小鼠皮肤光老化模型,免疫组化染色观察小鼠皮肤结构变化,测定小鼠体内血浆中SOD酶活性、谷胱甘肽还原酶(GSH-PX)酶活性、丙二醛含量。结果： 1.USFM在蛋白质浓度≤400μg／ml时,对HDF细胞无明显的细胞毒性。20μg／ml的USFM对HDF细胞生长具有显著的增殖效果。USFM预处理的HDF细胞经紫外辐射后细胞存活率为86.4%±1.10,与模型组相比(64.35%±3.22),具有显著性差异。USFM 20μg/ml、10μg／ml预处理的HDF细胞内SOD酶(超氧化歧化酶)活性分别是42.95±1.15U/ml、38.74±0.53 U／ml,与模型组HDF细胞内SOD酶活性相比21.31±1.31 U／ml,具有显著性差异。 2.成功建立小鼠光老化模型。老化的皮肤组织出现成纤维细胞损伤甚至破碎,弹力纤维和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维断裂,排列紊乱,弹力纤维样物质异常增生,同时伴有单核炎症细胞的浸润；体内SOD酶活性显著下降,为7.26±2.24U/ml,MDA(丙二醛)异常堆积,为25.93±1.16nmol/ml。外用USFM可以减轻皮肤光老化,胶原纤维虽有一定量的增加,但是排列整齐,同时炎症细胞浸润明显减少,与模型组比较,血浆中的SOD酶、谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-PX)显著增高,MDA含量显著减少。USFM 20μg/ml、10μg/ml预处理的小鼠体内SOD酶(超氧化歧化酶)活性分别是53.3±5.99U/ml、37.26±2.24U/ml,与模型组HDF细胞内SOD酶活性相比7.26±2.24U／ml,具有显著性差异。结论： 1.从医疗废弃物人脐带中分离得到间充质干细胞。 2.UVA能抑制HDF细胞生长,导致细胞凋亡与坏死。 3.UVA+UVB照射皮肤,能加速皮肤的光老化,削弱皮肤的抗氧化防御功能。 4. USFM具有良好的抗氧化作用。
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【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

【引证文献】