去卵巢大鼠海马和额叶皮层HCNP的变化及中枢胆碱能神经系统相关基因表达的变化

发布时间：2018-10-31 13:44

【摘要】： 目的观察雌激素缺乏对大鼠海马CA1/CA2区和额叶皮层HCNP的含量和ChAT、M1 AChR、α_7 nAChR及NMDA受体亚单位NR_1基因表达的影响。方法 1实验动物分组将4月龄雌性SD大鼠30只随机分为3组:假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢给予苯甲酸雌二醇组(OVX+EB组),每组10只。Sham组为双侧去除少量卵巢上脂肪组织;OVX组为去除双侧卵巢;OVX+EB组为去卵巢手术10天后给予苯甲酸雌二醇皮下注射,100μg/kg,隔日一次。手术后常规喂养4个月。 2组织标本的获取及指标测定麻醉大鼠,开颅并迅速分离海马背侧组织和额叶皮层置于液氮中,于-80℃低温冰箱保存,用于组织蛋白和组织总RNA的提取。分离大鼠子宫并进行称重。 2.1蛋白测定提取海马背侧组织蛋白及额叶皮层组织蛋白并用Bradford法测定蛋白含量,以每毫升样品中的毫克蛋白量(mg/ml)表示。β-actin作为HCNPpp的内参照,用western-blotting法测定大鼠海马C-HCNPpp和N-HCNPpp的相对含量。 2.2 mRNA表达的测定用Trizol法提取海马背侧组织和额叶皮层组织总RNA。用β-actin作为内参照,RT-PCR法测定海马背侧组织和额叶皮层HCNPpp mRNA、ChAT mRNA、NR_1 mRNA、M1 AChR mRNA及α_7 nAChR mRNA的相对表达量。结果 1大鼠子宫重量变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组大鼠子宫重量明显降低(P0.01),而Sham组和OVX+EB组大鼠子宫重量无差别。 2大鼠海马HCNPpp相对含量的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组C-HCNPpp的相对含量明显升高(P0.05),而Sham组和OVX+EB组之间无差别(P0.05)。但三组之间N-HCNPpp的相对含量的差别无统计学意义。 3大鼠皮层HCNPpp相对含量的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组C-HCNPpp的相对含量明显升高(P0.05),而Sham组和OVX+EB组之间无差别(P0.05)。但三组之间N-HCNPpp的相对含量的差别无统计学意义。 4大鼠海马HCNPpp mRNA表达水平的变化与Sham组比较,OVX组和OVX+EB组HCNPpp mRNA的相对表达量的无显著性差别(P0.05);与OVX组比较,OVX+EB组HCNPpp mRNA的相对表达量升高(P0.05)。5大鼠皮层HCNPpp mRNA表达水平的变化 Sham组、OVX组和OVX+EB组之间的HCNPpp mRNA的相对表达量无显著性差异(P0.05)。 6大鼠海马ChAT mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组ChAT mRNA的相对表达量明显降低(P0.05),而Sham组与OVX+EB组之间无差别(P0.05)。 7大鼠皮层ChAT mRNA表达水平的变化 Sham组、OVX组和OVX+EB组之间的ChAT mRNA的相对表达量无显著性差异(P0.05)。 8大鼠海马M1 AChR mRNA表达水平的变化与Sham组比较,OVX组M1 AChR mRNA相对表达量明显升高(P0.05),OVX+EB组M1 AChR mRNA相对表达量明显升高(P0.01),而OVX组和OVX+EB组无差别(P0.05)。 9大鼠皮层M1 AChR mRNA表达水平的变化 Sham组、OVX组和OVX+EB组,三组之间的M1 AChR mRNA的相对表达量无显著性差异(P0.05)。 10大鼠海马α_7 nAChR mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组α_7 nAChR mRNA相对表达量明显降低(P0.05),而Sham组和OVX+EB组无差别(P0.05)。 11大鼠皮层α_7 nAChR mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组α_7 nAChR mRNA相对表达量明显降低(P0.05),而Sham组和OVX+EB组无差别(P0.05)。 12大鼠海马NR_1 mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组NR_1 mRNA相对表达量明显降低(P0.05),而Sham组和OVX+EB组无差别(P0.05)。 13大鼠皮层NR_1 mRNA表达水平的变化 Sham组、OVX组和OVX+EB组之间的NR_1 mRNA的相对表达量无显著性差异(P0.05)。结论 1雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区及额叶皮层HCNP的增多。 2雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区ChAT、α_7 nAChR mRNA表达水平降低,此结果说明ChAT、α_7 nAChR mRNA水平受雌激素的调控,可能是雌激素缺乏导致AD发生发展的分子机制之一。 3雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区NR_1 mRNA表达水平降低,此结果说明NR_1 mRNA水平受雌激素的调控,可能是雌激素缺乏导致AD发生发展的分子机制之一。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R341

【参考文献】