FSH与bFGF在人卵巢组织体外培养的实验研究

发布时间：2018-12-23 08:31

【摘要】： 目的:研究来源于新鲜和玻璃化冻融复苏后的人卵巢组织,在体外培养条件下加入不同浓度的卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)或碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)后雌激素分泌情况、始基卵泡启动及生长卵泡的生长发育情况。进一步探讨体外培养条件下FSH与bFGF对人卵巢组织体外培养的影响,研究人卵巢组织的最佳体外培养条件,为卵巢早衰(POF)或女性恶性肿瘤患者进行卵巢移植术前卵巢培养提供必要的实验依据。方法:人卵巢组织体外培养体系基本参照Scott的方案。将12例取自妇科手术(平均年龄31.33±8.19岁)的新鲜或玻璃化冻融复苏后的人卵巢皮质切割成约1mm~3大小的组织块,并随机将12块组织设为1个实验组,根据在基础培养液中添加FSH的四种不同浓度(0IU/ml,5IU/ml,10IU/ml,15IU/ml)或bFGF的四种不同浓度(0ng/ml,1ng/m,10ng/ml,100ng/ml)随机分为16个组,其中新鲜培养组和冻融培养组各8个。实验中采用ECM人工基膜铺入96孔培养板,a-MEM培养液为基础培养液,并以器官组织培养的方法体外培养14d,每48h更换并收集培养上清以微粒化学免疫发光法(CIA)进行雌二醇(E_2)测定,于培养后的第14d留取培养后的所有组织粒进行HE染色和组织学观察,用统计软件SPSS11.5比较各组卵巢内各期卵泡的发育情况及卵泡构成比。结果:1、用基础培养液培养8d后,新鲜和冻融卵巢组织的E_2水平较培养2d和14d后高,但差异无统计学意义(P＞0.05)。从组内两两比较的方差分析(q检验)结果得出,新鲜与冻融卵巢培养组之间,在E_2水平及各期卵泡构成比方面均无统计学差异(P＞0.05)。2、在含FSH的培养液中,加入FSH后,培养2d、8d、14d后的E_2水平随FSH浓度增加而增加,呈浓度依赖趋势,尤其是培养14d后与2d间的E_2水平存在统计学差异(P＜0.05);培养14d后FSH15IU/ml组与对照组E_2水平有显著性差异(P＜0.05),但与FSH10IU/ml组E_2水平差异无统计学意义(P＞0.05);FSH10IU/ml组在初级卵泡率、次级卵泡率方面与对照组和FSH5IU/ml组相比是升高的,始基卵泡率、异常卵泡率方面与对照组和FSH5IU/ml组组间相比是降低的,差异有统计学意义(P＜0.05)。3、在含bFGF的培养液中,培养8d后的E_2水平高于培养2d和14d后的E_2水平,但无显著性差异(P＞0.05):相同培养时间下,bFGF100ng/ml组E_2水平高于对照组和bFGF1ng/ml组、bFGF 10ng/ml组,但无统计学意义(P＞0.05);从组内两两比较分析(q检验)结果可以得出,bFGF各浓度组在培养14d后的始基卵泡率、初级卵泡率、次级卵泡率及异常卵泡率方面与对照组相比均无统计学差异(P＞0.05)。 4、在培养液中加入FSH或bFGF培养14d后,新鲜与冻融卵巢组织培养对比发现,两组在E_2水平和各期卵泡构成比方面均无统计学差异(P＞0.05) 结论:1、冻存复苏的卵巢组织经体外培养后,能够保持与新鲜卵巢近似的E_2分泌功能和各期卵泡构成比,这将有利于冻融卵巢组织移植后的生长发育和功能恢复。2、研究发现加入FSH(FSH5IU/ml、FSH10IU/ml、FSH15IU/ml)的培养液能够增加E_2水平,可促进生长卵泡进一步的发育。尤其是加入FSH10IU/ml后延长培养时间至14d,可以使生长期卵泡比例增加,并能进一步降低异常卵泡比例。因此,在人卵巢皮质块培养液中加入FSH10IU/ml,并培养14d可以近似作为体外卵巢组织培养方案之一。3、在培养液中加入bFGF10ng/ml和bFGF100ng/ml后,均可以促进E_2的分泌。但培养14d后这两个bFGF浓度组对卵巢培养中的生长期卵泡无明显影响,也不能明显降低异常卵泡比例。因此,bFGF对体外卵巢培养中的早期卵泡作用有待进一步研究。4、体外培养条件下卵巢组织的卵泡生长发育良好,可能由于是在体外卵巢组织摆脱了体内复杂因素的调控,解脱了体内某些抑制卵泡发育的因素,使卵泡得以生长发育。5、在本实验培养条件下,FSH是人卵巢组织中早期卵泡存活的重要调节因子,而bFGF对于人卵泡发育及始基卵泡启动无明显影响。
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【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R329.3

【引证文献】