组织因子在人脐静脉内皮细胞缺氧再复氧损伤中的作用及其机制研究

发布时间：2019-01-02 07:10

【摘要】：缺氧再复氧(anoxia-reoxygenation, A/R)是指细胞在缺乏氧供应一段时间之后恢复供氧的过程,在恢复氧供应初期的短暂时间内,经历缺氧损伤的细胞不仅没有减轻损伤,反而加重损伤,这种现象称为缺氧再复氧损伤。临床上多种缺血性心、脑血管疾病都伴有相应器官和组织的缺血再灌注损伤,缺血再灌注损伤也是多种缺血性心、脑血管疾病共有的病理生理学基础。缺血再灌注是对于有血液供应的组织和/或器官而言,而对于无血液供应的细胞来说则是缺氧再复氧。缺氧再复氧发生后最明显的变化是产生大量的活性氧,引起脂质过氧化,造成细胞损伤,严重者导致细胞整体被破坏。缺氧再复氧或缺血再灌注除涉及脂质过氧化外,凝血和炎症等病理过程也参与了缺氧再复氧或缺血再灌注。TF作为外源性凝血系统的启动者,是凝血系统中唯一的细胞膜蛋白。近年来的研究发现,TF除参与凝血过程外,还作为信号转导分子介导肿瘤、胚胎发育、血管新生、炎症、动脉粥样硬化形成等多种病理生理过程。由此可见,TF在缺氧再复氧(缺血再灌注)损伤的发生、发展过程中可能起一定的作用。那么TF在缺氧再复氧(缺血再灌注)损伤过程中如何起作用?起什么作用?目前尚无相关报道。本研究以人脐静脉内皮细胞为研究对象,经过体外的缺氧再复氧过程,观察了TF在缺氧再复氧过程中的作用,并就其机制进行了初步探讨。 [目的]研究组织因子在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)缺氧再复氧损伤中的作用,并探讨其机制。 [方法]HUVECs随机等分成正常对照组、缺氧再复氧组(A/R)、反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, aODN/TF)+缺氧再复氧组(aODN/TF+A/R组)、正义寡脱氧核苷酸(sense oligodeoxynucleotide, sODN/TF)+缺氧再复氧组(sODN/TF+A/R组)以及错配寡脱氧核苷酸(mismatched oligodeoxynucleotide, mODN/TF)+缺氧再复氧组(mODN/TF+A/R组),3个寡脱氧核苷酸组的HUVECs分别转染aODN/TF、sODN/TF和mODN/TF。4个缺氧再复氧组的HUVECs经历3小时的缺氧,继以2小时的再复氧。收集各组HUVEC,用体外细胞核转录检测TFmRNA。一期凝血法测定TF促凝活性(tissue factor procoagulant activity, TF:C),酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测TF抗原(tissue factor antigen, TF:Ag)的含量。并检测HUVECs的活性、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、丙二醛(malonaldehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase, GSH-PX)、一氧化氮(nitric oxide, NO)和内皮素-1(endothelin-1, ET-1)的含量。另将HUVECs随机等分为正常对照组、缺氧再复氧组(A/R)和灭活FVIIa+缺氧再复氧组(FVIIai+A/R组)。FVIIai+A/R组在HUVECs培养基中加入1,5-丹酰-谷氨酰-甘氨酰-精氨酰氯甲酰酮(DEGRck)灭活的人凝血因子Ⅶa(终浓度200nM)。A/R组和FVIIai+A/R组HUVECs经过缺氧再复氧后,流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)、凝血酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1, PAR-1)、凝血酶激活受体-2(proteinase activated receptor-2, PAR-2)、磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen activated protein kinases, phospho-p38 MAP kinase)和磷酸化p42/44有丝分裂原活化蛋白激酶(phospho-p42/44 mitogen activated protein kinases, phospho-p42/44 MAP kinase)的相对含量。 [结果]缺氧再复氧之后,TF表达在mRNA及蛋白质水平方面均有增加,细胞活力、SOD、GSH-PX和NO的含量均减少,而LDH, MDA及ET-1的表达增加(与正常对照组相比P0.05～0.001)。aODN/TF+ A/R组HUVEC中的TF表达被抑制,细胞活力、SOD、GSH-PX和NO下降的程度较A/R组减小,LDH、MDA及ET-1增加的程度较A/R组减小(与A/R组相比P0.05～0.01)。缺氧再复氧之后,流式细胞学检测显示,ROS、PAR-1、PAR-2及p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶均不同程度的激活(与正常对照组相比,P0.001), FVIIai能够抑制缺氧再复氧过程中ROS、PAR-1、PAR-2及p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶的激活,并改善缺氧再复氧过程中TF:C、MDA、SOD、GSH-PX、细胞活力和LDH的变化(与A/R组相比,P0.05～0.001)。 [结论]在缺氧再复氧损伤过程中,TF不仅介导了凝血过程,而且通过激活PAR-1、PAR-2、p38 MAP激酶和p42/44 MAP激酶诱发了炎症反应,从而加重了细胞损伤。因而TF是缺氧再复氧损伤的“中心分子”,它将缺氧再复氧、凝血和炎症等病理过程联系在了一起,形成一个复杂的网络。本研究对完善缺氧再复氧和缺血再灌注损伤的机制提供了重要依据。
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【学位授予单位】：汕头大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R363

【参考文献】