TGF-β体外诱导调节性T细胞的信号机制及其应用的研究

发布时间：2019-01-22 14:21

【摘要】： 目的:了解TGF-β家族成员BMP-2/BMP-4是否能够替代TGF-β,或者促进TGF-β体外诱导调节性T细胞(Treg)的能力,及其可能的机制。 方法:利用免疫磁珠分选出不同基因型小鼠脾脏的Na?ve CD4+细胞,经过TCR刺激,加入IL-2 (20 U/ml),按照不同的培养要求加TGF-β(2 ng/ml), BMP-2 (10 ng/ml), BMP-4 (10 ng/ml)。在体外诱导3天后收集细胞,用细胞内染色检测Foxp3的变化。部分培养条件中加入Noggin,JNK和ERK的阻断剂。Western Blot检测BMP对Smad1磷酸化的影响。另外,将BMP体内注射,观察外周血,淋巴和脾脏内CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞占CD4~+T细胞的比例。分离出脾脏的CD4~+CD25~+T细胞通过混合淋巴细胞培养分析其抑制功能。 结果:体外TCR刺激的情况下,BMP-2,BMP-4本身并不能够诱导产生Foxp3~+T细胞。Noggin阻断BMP受体,但并不影响TGF-β体外诱导Treg的能力。BMP-4能够增加TGF-β体外诱导Treg的能力。体内注射BMP不能增加Foxp3~+细胞的比例,但能够促进TsA增加Foxp3的能力。BMP本身不能够扩增自然Treg,另外BMP联合TGF-β诱导后的T细胞更能抵抗凋亡。BMP-2,BMP-4除了增加Smad1的磷酸化,主要能够增加ERK,JNK磷酸化来促进Foxp3~+ T细胞的诱导。 结论:BMP-2,BMP-4单独并不能够诱导Treg;无论在体内还是体外,BMP都能促进TGF-β诱导Treg的能力;BMP这种能力主要依赖于MAKP的ERK和JN K信号。 目的:探讨TGF-β诱导调节性T细胞和Th17生成中TGF-β下游信号机制,了解这两群细胞体外诱导分化中TGF-β作用的不同信号机制。 方法:利用Auto MACS来分选出不同基因型小鼠脾脏内的Na?ve CD4~+T细胞。按照调节性T细胞和Th17细胞不同的诱导条件进行体外诱导。根据实验要求分别加入MAKP, P38,JNK或ERK阻断剂。体内实验通过向小鼠腹腔注射TsA,由FACS分析不同基因型小鼠体内Foxp3~+T细胞的变化。利用不同基因型小鼠来免疫诱导EAE小鼠模型,分离出脾脏淋巴细胞分析Th17含量的变化,一组EAE模型在免疫诱导后注射P38阻断剂,在相同时间点来分析Th17的含量的变化。 结果:在体外实验中,敲除Smad2/Smad3基因后,TGF-β仍然能够诱导出Treg,但是能力稍弱。当加入MAKP,JNK或ERK阻断剂后能够明显削弱TGF-β体外诱导Treg的能力。体内实验中,缺乏Smad3信号时atRA仍然能够促进iTreg的生成和抑制Th17的生成。在EAE模型中,P38抑制剂能明显降低EAE的发病程度。 结论: TGF-β信号是体外TGF-β诱导调节性T细胞和Th17细胞生成所必须的信号通路;Smad信号在TGF-β诱导调节性T细胞中只有部分作用;TGF-β的MAKP信号通路在TGF-β诱导调节性T细胞和Th17细胞生成中也起着关键性的作用。TGF-β下游的MAKP中,ERK和JNK信号通路参与了Treg的分化,而JNK和P38参与了Th17的分化。 方法:体外分离出人外周血PBMC中的Naive CD4~+ T细胞,在体外经过anti-CD3CD28-beads的TCR刺激后,伴有IL-2,和/或TGF-β,和/或Rapamycin(RAPA)诱导7天后,检测细胞表面CTLA-4和细胞内FOXP3等的表达。通过混合淋巴细胞培养分析诱导后细胞体外抑制活性。将体外诱导的细胞和PBMC同时注射到免疫缺陷鼠体内观察其对异种移植物抗宿主反应的抑制情况。同时分析人细胞在小鼠组织内的浸润情况。 结果:RAPA能够诱导TCR刺激后的Na?ve CD4~+细胞成为FOXP3~+T细胞,该功能在加入ALK5阻断剂后消失。RAPA联合TGF-β能够诱导出具有免疫抑制功能的CD4RAPA,该细胞表达膜表面TGF-β,其体外抑制功能在加入ALK5阻断剂后丧失。将PBMC(20×10~6)注射给RAG2~(-/-)γc~(-/-)小鼠会诱发急性异种移植物抗宿主病,同时给予CD4_(RAPA)则能够明显延长小鼠的存活时间,减少人细胞的组织浸润。 结论:RAPA能够增加CD4~+ T细胞FOXP3的表达,依赖于TGF-β信号;RAPA能够联合TGF-β在体外诱导出类似于nTreg表型的FOXP3~+ T细胞。这群细胞高表达趋化因子的受体,该细胞本身在TCR刺激时并不在增殖。RAPA联合TGF-β诱导的Treg表达膜表面的TGF-β,其抑制活性依赖于mTGF-β。将RAPA联合TGF-β诱导的Treg输注给RAG2~(-/-)γc~(-/-)小鼠,能够明显减轻异种移植物抗宿主反应,延长小鼠的存活。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈将南;吕秋琼;汤佳良;陶叶海;;CD4~+、CD25~+调节性T细胞与急性乙型肝炎转归的探讨[J];上海预防医学;2011年06期

2 罗莉;罗德梅;刘盼盼;董旭南;;调节性T细胞和转化生长因子β与初发类风湿性关节炎相关性研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年07期

3 林群;朱玲;;CD_4~+T细胞在哮喘中的作用[J];医学综述;2011年12期

4 刘子平;白钰;张朕杰;;产生IL-10的调节性B细胞在免疫调节中的作用[J];中国医药指南;2011年21期

5 龙玲;吴达;霍生东;;红景天甙体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2011年07期

6 傅艳红;孙耕耘;;CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞与肺癌的研究进展[J];临床肺科杂志;2011年09期

7 邱燕;吴蓉;刘东华;;氟喹诺酮类药物体外多步诱导鲍曼不动杆菌产生交叉耐药性的研究[J];临床检验杂志;2011年04期

8 刘运洪;孟明耀;解燕华;刘莹;魏传钰;侯宗柳;;人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后细胞表型与细胞毒活性相关性研究[J];中国细胞生物学学报;2011年05期

9 洪剑;王磊;王玉华;许望翔;葛常辉;;Notch配体阳性的成纤维基质细胞体外诱导胸腺细胞发育和凋亡的影响[J];中华临床医师杂志(电子版);2011年09期

10 李丹;梁华;邵一鸣;;Treg和Th17失衡与HIV感染的相关性研究进展[J];青岛大学医学院学报;2011年04期

相关会议论文 前10条

1 付蓉;陈瑾;王红蕾;王君;李丽娟;刘惠;王一浩;任悦;邵宗鸿;;骨髓Coombs实验(+)血细胞减少患者调节性T细胞数量及功能研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

2 许利军;吴南屏;陈亮;范薇薇;;CD4~+CD25~+调节性T细胞和CD38的表达在HIV感染者中的关系[A];2006年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2006年

3 张爱军;冀学斌;王琳;张晓琳;彭军;侯明;;靛玉红对小鼠CD4~+CD25~(high)调节性T细胞的影响[A];第十一届全国血栓与止血学术会议暨血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展学习班论文摘要汇编及学习班讲义[C];2007年

4 申洁;刘健航;费烨;陈洪;陈向东;;PV患者CD4~+CD25~+调节性T细胞数量及Foxp3基因表达的研究[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

5 毕美;周瑾;李玉姝;单忠艳;滕卫平;;Graves病小鼠模型发病中调节性B细胞的表达变化[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

6 周家国;刘玉洁;汤勇波;庞瑞萍;丘钦英;关永源;;Simvastatin抑制脑血管平滑肌细胞增殖与容积调节性氯通道的关系[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年

7 袁向亮;陈磊;李美星;董平;张通通;薛剑;沈立松;;胃癌微环境调节性T细胞通过COX2-PGE2途径发挥免疫抑制功能[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

8 沈立松;;调节性T细胞与肿瘤免疫调节的研究进展[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

9 韩岩梅;郭秋莉;张明刚;曹雪涛;;CD4~+CD69~+CD25~-新型调节性T细胞亚群在肿瘤免疫逃逸中的作用及相关机制研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

10 闫晓波;冯银玲;凌云阳;王丽华;;雌二醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎调节性T细胞及细胞因子的影响[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 中国人民大学人口研究所教授 邬沧萍;人口老龄化能调节性别比吗[N];中国老年报;2001年

2 记者 于丽珊邋通讯员 黄显斌;肝癌发病机制研究获进展[N];中国中医药报;2007年

3 胡德荣 黄欢;调节性T细胞有望阻断脂肪肝恶化进程[N];中国医药报;2007年

4 黄显斌;我国肝癌发病机制研究获重大进展[N];大众科技报;2007年

5 黄显斌;我国肝癌发病机制研究取得进展[N];中国医药报;2007年

6 黄显斌;肝癌发病机制研究获重大进展[N];健康报;2007年

7 记者 唐先武邋通讯员 黄显斌;我科学家在肝癌发病机制研究中获新进展[N];科技日报;2007年

8 记者 施嘉奇邋通讯员 黄欢;调节性T细胞有望阻止脂肪肝恶化[N];文汇报;2007年

9 黄显斌邋唐明山;我科学家在肝癌发病机制研究中取得重大进展[N];光明日报;2007年

10 记者　江卉、实习生 吴星、通讯员　朱思标;8万课改生参加武汉“新中考”[N];湖北日报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 吕凌;TGF-β体外诱导调节性T细胞的信号机制及其应用的研究[D];南京医科大学;2010年

2 李小燕;人类调节性γδT细胞的体外诱导、表型鉴定、免疫调节活性及与系统性红斑狼疮的相关性研究[D];北京协和医学院;2010年

3 沈淼达;联合应用TGF-β1-Fc融合蛋白和雷帕霉素促进调节性T细胞的诱导分化和胰岛移植物的耐受[D];浙江大学;2012年

4 孔宁;TGF-β诱导的CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞对胶原诱导性关节炎的抑制作用及机制研究[D];复旦大学;2011年

5 陈康杰;调节性T细胞与肝细胞肝癌发生发展关系的研究[D];浙江大学;2012年

6 赵小峰;人类上皮性卵巢癌细胞培养上清诱导CD4+CD25-CD45RA+初始T细胞向调节性T细胞转化的研究[D];浙江大学;2010年

7 林星光;调节性T细胞在母胎耐受中的作用机制及对H-Y皮肤移植影响的研究[D];华中科技大学;2010年

8 王军;调节性细胞容积减小的离子机制的研究[D];第四军医大学;2002年

9 孙红玉;表皮样干细胞瘤化的发生和TGF-β1信号通路的关系以及极性相关分子的变化[D];第二军医大学;2010年

10 唐春莲;调节性T细胞对日本血吸虫GST疫苗保护性效果的影响及机制研究[D];华中科技大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 王晓格;调节性T细胞及TGF-β_1在再生障碍性贫血患儿外周血中的变化及意义[D];郑州大学;2010年

2 阿依姆妮萨·阿卜杜热合曼;CD4~+CD25~+CD127~（low）Tregs及TGF-β1在特发性血小板减少性紫癜患者外周血的表达分析[D];新疆医科大学;2010年

3 龙瑶;IL-1对Treg细胞分化发育的影响[D];第二军医大学;2010年

4 蒙菁菁;香烟暴露大鼠中CD4+Foxp3+调节性T细胞与CD4+IL-17+T细胞的变化及意义[D];广西医科大学;2011年

5 陈云龙;卡介苗/结核菌纯蛋白衍化物对儿童哮喘T细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响[D];安徽医科大学;2010年

6 陈玉梅;双歧杆菌完整肽聚糖治疗食物过敏小鼠及对调节性T细胞影响的研究[D];重庆医科大学;2011年

7 张兴华;剔除调节性T细胞增强RAK过继免疫治疗机制的研究[D];北京协和医学院;2011年

8 童琳琳;过敏性紫癜患儿外周血CD4~+CD25~+CD127~-调节性T细胞的表达及临床意义[D];山西医科大学;2011年

9 何跃;Herpesvirus Entry Mediator/CD160介导人调节性T细胞对CD4~+效应性T细胞的抑制作用[D];第三军医大学;2011年

10 范右飞;成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者血清IL-10、TGF-β水平及其与胰岛β细胞功能的关系[D];山东大学;2010年

，

本文编号：2413296