供体未成熟树突状细胞对急性血管性排斥反应的影响

发布时间：2019-03-27 16:42

【摘要】： 目的:利用小鼠到大鼠异种异位心脏移植模型,研究供体未成熟树突状细胞对急性血管性排斥反应(acute vascular rejection,AVR)的影响,探讨异种心脏移植免疫耐受机制。方法:两组体外培养的小鼠骨髓细胞,分别采用常规剂量(GM~(hi))和低剂量(GM~(lo))GM-CSF诱导,使其分化为树突状细胞(DC)。倒置显微镜观察两组DC(GM~(hi)DC和GM~(lo)DC)形态,流式细胞术检测DC表面CD11c、CD86、MHC-Ⅱ及混合淋巴细胞反应实验检测DC对异种T细胞的增殖能力的影响来鉴定DC的纯度及成熟度。成功获得小鼠骨髓源树突状细胞,行小鼠到大鼠颈部心脏移植。小鼠和SD大鼠分别作为供受体,随机分为三组,A组(对照组):仅行小鼠到大鼠颈部心脏移植;B组(GM~(hi)DC组):受体静脉注射GM~(hi)DC后第7天行小鼠到大鼠颈部心脏移植;C组(GM~(lo)DC组):受体静脉注射GM~(lo)DC后第7天行小鼠到大鼠颈部心脏移植。测定移植前一天各组受体外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例及血清IL-10、TGF-β1水平、记录各组移植心脏的存活时间和病理变化。结果:(1)GM-CSF培养小鼠骨髓前体细胞所得细胞CD11c阳性率:常规剂量组为71.94±2.92%,低剂量组为70.46±2.53%,两者无显著性差异(P 0.05)。(2)CD11c+细胞(DC)表面MHCII、CD86表达:GM~(hi)DC分别为66.47±2.55%、11.43±1.87%,GM~(lo)DC分别为59.92±3.50%、0.98±0.56%。GM~(hi)DC表面MHCII阳性率较GM~(lo)DC高表达(P 0.05),GM~(hi)DC表面CD86阳性率较GM~(lo)DC高(P 0.05)。(3)MLR测得吸光度(optical density,OD)值:GM~(hi)DC组为1.1±0.08,GM~(lo)DC组为0.60±0.03;刺激效应:GM~(hi)DC组为173.81±10.05%,GM~(lo)DC组为49.03±5.54%,两组比较有显著性差异(P0.05)。(4)供心存活时间:A组:1.98±0.51天,B组:1.8±0.57天,C组:3.2±0.27天,A与B组组间比较P㧐0.05,C组较A组和B组延长(P 0.05)。(5)移植后供心病理:A组、B组、C组呈急性血管排斥反应。(6)大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例:A组:2.7±0.57%,B组:2.89±0.81%,C组:5.54±1.18%,A与B组比较P㧐0.05,C组较A组和B组高(P 0.05)。(7)大鼠血清IL-10、TGF-β1水平:A组:18.87±2.69 pg/ml、25.78±3.26 pg/ml,B组:20.74±5.36 pg/ml、27.07±5.24 pg/ml,C组:26.12±4.88 pg/ml、34.00±3.80 pg/ml,A与B组比较P㧐0.05,C组较A组和B组高(P 0.05)。结论:利用GM-CSF诱导培养小鼠骨髓前体细胞,能得到足量纯度较高的树突状细胞。常规剂量组培养所获得的DC(GM~(hi)DC)为成熟DC与未成熟DC的混合体,表型为CD11c+、MHCIIhi、CD86+;而低剂量组培养所获得的DC(GM~(lo)DC)为较为单一的未成熟DC,表型为CD11c+、MHCIIlow、CD86_。GM~(lo)DC与GM~(hi)DC相比,体外刺激异种T淋巴细胞的增殖能力较弱。静脉注射供者imDC对异种心脏移植受体AVR有一定的抑制作用,可以延长供心存活时间。这可能与imDC诱导产生CD4+CD25+调节性T细胞有关。细胞接触机制和细胞因子可能都参与了CD4+CD25+调节性T细胞诱导免疫耐受的过程。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

【参考文献】