PNIPAAm温敏培养皿的制备及其细胞片的研究

发布时间：2019-03-28 18:26

【摘要】： 目的：(1)探索以电子加速器合成具有温度敏感特性的聚异丙基丙烯酰胺凝胶(PNIPAAm)及接枝有PNIPAAm水凝胶的培养皿的方法。通过适当后续处理使该培养皿适合细胞的生长及增殖；(2)探讨角膜基质等细胞在温敏材料PNIPAAm水凝胶上的生长条件及特性,以及利用PNIPAAm水凝胶获得的细胞片；(3)体外培养兔口腔黏膜上皮细胞(OMECs),探索一种较好的体外增殖OMECs的方法。 方法：(1)配制0.5%的亚甲基丙烯酰胺(MBA)和55%异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)的异丙醇溶液70ul,加入35mm聚苯乙烯(TCP)培养皿中,使用电子加速器给与250kgy辐射。傅立叶红外、扫描电镜、原子力显微镜等研究辐射合成的温敏材料的物理及化学性质。(2)辐射合成的接枝了PNIPAAm水凝胶的温敏培养皿通过后续的去离子水的浸泡、环氧乙烷消毒处理后,接种角膜基质等细胞,置于37℃,5%CO2孵箱培养。通过倒置相差显微镜,HE染色,扫描电镜等研究细胞在温敏材料上生长的条件及特性,以及降低温度后获得的细胞片的形态学结构。(3)采用角质细胞无血清培养基(K-SFM)配制的DispaseⅡ消化分离培养兔OMECs细胞,接种于钙离子浓度分别为0和0.09mmol／L的K-SFM培养基。通过倒置显微镜、扫描电镜、免疫荧光方法观察研究,探索一种较好的体外增殖OMECs方法。 结果：(1)配制0.5%MBA和55%NIPAAm单体的异丙醇溶液,使用电子加速器给与250kgy辐射可获得温敏培养皿。傅立叶红外显示辐射合成了PNIPAAm,观察发现有温敏特性。扫描电镜显示PNIPAAm凝胶呈现较多的微孔结构。原子力显微镜显示温敏材料表面轻度粗糙。(2)经过浸泡及消毒处理后,接种角膜基质细胞培养。倒置显微镜及扫描电镜观察显示,细胞在温敏材料上生长良好,七天后细胞长成片,降低温度,能获得细胞片；HE染色显示细胞片无任何载体。(3)通过使用K-SFM配制的DispaseⅡ,联合胰蛋白酶消化OMECs,制成细胞悬液接种于无血清的K-SFM培养基中,OMECs生长旺盛,呈鹅卵石状,细胞之间连接紧密；OMECs广谱角蛋白表达阳性；通过CCK8增值实验显示OMECs在无钙和低浓度钙离子(0.09mmol／L)存在的情况下,细胞增殖无统计学差别。 结论：(1)使用本实验提供的方法,可以合成具有温敏特性的PNIPAAm水凝胶及接枝了PNIPAAm水凝胶的培养皿；(2)辐射合成的接枝了PNIPAAm水凝胶的温敏培养皿提供了一种获得无任何载体的细胞片的方法；(3)本实验探索了一种改良的OMECs培养方法,使用本方法能够在体外快捷的培养出单纯的,能多次传代的OMECs。
[Abstract]:Aim: (1) to explore the synthesis of temperature sensitive poly (isopropylacrylamide) gel (PNIPAAm) by electron accelerator and the grafting of PNIPAAm hydrogel into petri dish. The culture dish was suitable for cell growth and proliferation by proper follow-up treatment. (2) to investigate the growth conditions and characteristics of corneal stroma and other cells on PNIPAAm hydrogel, as well as the cell slices obtained by PNIPAAm hydrogel. (3) in vitro culture of rabbit oral mucosal epithelial cells (OMECs),) to explore a better method for proliferation of OMECs in vitro. Methods: (1) 0.5% methylene acrylamide (MBA) and 55% isopropyl acrylamide (NIPAAm) isopropanol solution 70 uls were prepared and added to 35mm polystyrene (TCP) dish. 250kgy radiation was given by electron accelerator. Fourier transform infrared (FTIR), scanning electron microscopy (SEM) and atomic force microscopy (AFM) were used to study the physical and chemical properties of thermosensitive materials synthesized by radiation. (2) the thermosensitive petri dish grafted with PNIPAAm hydrogel was immersed in subsequent deionized water. After disinfection with ethylene oxide, corneal stromal cells were inoculated and cultured in 5%CO2 incubator at 37 鈩，

本文编号：2449118