抗人骨桥蛋白单克隆抗体制备及其特异性研究

发布时间：2019-04-01 07:22

【摘要】： 骨桥蛋白(osteopontin, OPN),是一种在多种组织和细胞广泛表达的磷酸化糖蛋白。OPN具有多种生物学功能,特别是OPN与自身免疫,肿瘤的生长和转移有密切的关系。 目的：制备人骨桥蛋白(osteopontin, OPN)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其生物学功能. 方法：利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因.构建OPN原核表达质粒,转化BL21菌株,IPTG诱导表达rhOPN.利用纯化的rhOPN蛋白为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合,通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白mAb杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.通过细胞侵袭试验检测抗人OPN单克隆抗体的功能. 结果：获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和285,亚型测定皆为IgG1,且这2株抗体皆能很好地抑制细胞迁移. 结论：本研究成功获得了2株抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,且这2株抗体皆能很好地抑制细胞迁移。为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.
[Abstract]:Osteopontin (osteopontin, OPN), is a phospho-glycoprotein widely expressed in many tissues and cells. OPN has many biological functions, especially OPN is closely related to autoimmune, tumor growth and metastasis. Objective: to prepare human osteopontin (osteopontin, OPN) specific monoclonal antibody (mAb), and identify its biological function. Methods: human osteopontin (hOPN) gene was cloned by RT-PCR. Construction of prokaryotic expression plasmid of OPN, transformation of BL21 strain and expression of rhOPN. induced by IPTG The purified rhOPN protein was used as immunogen to immunize BABL/c mice, and the spleen cells were fused with mouse myeloma cells NS1. The hybridoma cell lines against human OPN protein mAb were obtained by cloning and indirect ELISA screening by limited dilution method. The hybridoma cell lines against human OPN protein mAb were obtained with ELISA,. The specificity of antibody was identified by Western blot. Monoclonal antibody recognition antigen sites were analyzed by competitive inhibition test. The function of anti-human OPN monoclonal antibody was detected by cell invasion test. Results: two monoclonal antibodies against human OPN were obtained, named 8F1 and 285 respectively. The subtypes were determined as IgG1, and both of them could inhibit cell migration well. Conclusion: two specific monoclonal antibodies against human osteopontin have been successfully obtained in this study, and both of these monoclonal antibodies can inhibit the migration of human osteopontin cells. It provides an important tool for further study of the function of OPN protein in autoimmune diseases and tumors.
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

【共引文献】

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本文编号：2451358