CyclinD1对神经干细胞的增殖和分化作用的调节及其机制研究

发布时间：2019-04-23 22:06

【摘要】： 目的优化出生后1-3d小鼠神经干细胞(NSCs)分离和无血清培养方法,观察其生长、增殖和分化特点。 方法采用无血清培养技术,以Neurobasal+B27培养液和DMEM/F12+N2培养液为基础培养基,添加碱性成纤维细胞生长因子、血小板生长因子,分离出生后1-3d的小鼠海马、室管膜下区进行体外扩增培养、传代观察,计算克隆形成率,比较两种培养基对干细胞增殖的影响。去除丝裂原刺激并加入1%FBS对神经干细胞进行诱导分化,以免疫细胞化学方法对神经干细胞以及其分化后的细胞进行鉴定并观察诱导不同时间后的分化特点。 结果分离获取的细胞具有自我更新和增殖能力,原代及传代培养均可形成细胞克隆,克隆中的细胞巢蛋白(Nestin)表达阳性,显微镜下观察见典型的干细胞特征,诱导分化后的细胞经免疫荧光检测GFAP(星形胶质细胞标志物)和TUJI(神经元标志物)表达均为阳性。且在去除丝裂原加入1%FBS后,观察到GFAP和TUJI双标阳性的细胞,且百分率随时间的延长,逐渐减少(分化7天的百分率为77.33±3.79%,分化14天的百分率降为23.67±4.16%,分化20天的百分率进一步降为14.67±3.06%,(P0.01))。 结论采用无血清培养技术可获得大量的神经干细胞,分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs,可诱导分化为终末神经细胞,且分化具有时空性。 目的：观察Cyclin D1基因敲除其对小鼠神经干细胞(NSC)细胞周期和凋亡的影响。 方法：选用Cyclin D1基因敲除小鼠,采用无血清培养技术离体培养干细胞增殖,流式细胞术观察Cyclin D1基因敲除对神经干细胞细胞周期的影响,并通过TUNEL方法检测神经干细胞凋亡的百分率并进行统计学分析。 结果：Cyclin D1基因敲除使神经干细胞细胞周期更多的阻滞于G0/G1期,经TUNEL检测凋亡发现cyclinD1敲除后,CyclinD1+/+组为18.00±3.61,而CyclinD1-/-组为55.00±6.24,其神经干细胞凋亡的百分率明显升高(P0.01)。 结论：通过Cyclin D1基因敲除,使神经干细胞细胞周期更多的阻滞于G0/G1期,并诱导其凋亡。 目的：采用cyclin D1基因敲除小鼠,观察细胞周期调控对小鼠神经干细胞(NSC)分化的影响。 方法：选用cyclin D1基因敲除小鼠,采用无血清培养技术离体培养神经干细胞,在1%FBS+LIF+BMP-2的作用下诱导神经干细胞向星形胶质细胞分化,在RA和Forskolin的作用下诱导神经干细胞分化为神经元,采用免疫荧光的方法观察cyclin D1基因敲除对神经干细胞分化为星形胶质细胞和神经元的影响并进行统计学分析。 结果：经统计学分析,cyclin D1敲除后,GFAP的阳性率明显降低(P0.01),TUJI的阳性率没有明显改变,cyclin D1基因敲除显著减少了神经干细胞向星形胶质细胞细胞分化,而对神经干细胞向神经元分化没有显著影响。 结论：通过cyclin D1基因敲除,显著抑制了神经干细胞向星形胶质细胞分化。 目的：采用cyclin D1基因敲除小鼠,观察细胞周期调控对在体小鼠神经干细胞(NSC)增殖的影响。 方法：选用cyclin D1基因敲除小鼠,分为Cyclin D1+／+,Cyclin D1+/．和Cyclin D1-/三组,采用腹腔注射BrdU(50mg／kg),7d后取材,进行冰冻切片,免疫荧光观察BrdU的阳性率,观察cyclin D1基因敲除对神经干细胞增殖的影响并进行统计学分析。 结果：经统计学分析,cyclinD1敲除后,和cyclinD1+／+ and CyclinD1+／-组相比,SVZ区的DG和SVZ区BrdU的阳性率明显降低(DG区cyclinD 1-／-为16.67±1.76% cyclinD1+／+为33.00±1.16%,(P0.01),SVZ区cyclin D1基因敲除BrdU的阳性率显示了更明显的下降,cyclinD1-/-为31.67±2.03,wild type为92.00±4.36, (P0.01)。 结论：通过cyclin D1基因敲除,显著抑制了在体DG和SVZ区神经干细胞的增殖。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

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本文编号：2463840