Klotho蛋白对高糖作用下人脐静脉血管内皮细胞凋亡和衰老的作用

发布时间：2019-05-14 03:10

【摘要】：目的研究抗衰老Klotho蛋白对高糖作用下人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡和衰老的抑制作用及其机制。方法培养HUVECs细胞,设置C组(加同体积PBS培养基)、L组(加含低浓度5.5 mmol/L葡萄糖组培养基)、H组(加含高浓度33.3 mmol/L葡萄糖组培养基)、K1组(加含0.1μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖组培养基)、K2组(加含1μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖组培养基)、K3组(加含10μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖组培养基),分别处理48 h。SA-β-半乳糖苷酶染色法检测各组HUVECs细胞衰老情况;RT-PCR方法检测各组HUVECs中人端粒酶逆转录酶mRNA的表达情况;流式细胞术检测各组HUVECs的细胞凋亡率;Western-blot法检测各组HUVECs中凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2表达情况。结果与PBS对照组相比,高浓度葡萄糖组中HUVECs细胞中SA-β-半乳糖苷酶染色阳性率显著上升(P0.05),端粒酶逆转录酶mRNA表达显著下降(P0.05)。而当不同浓度Klotho蛋白和高糖同时作用HUVECs时,细胞中SA-β-半乳糖苷酶染色阳性率逐渐下降(P0.05),端粒酶逆转录酶mRNA表达则逐渐上升(P0.05);高浓度葡萄糖组中HUVECs细胞凋亡率显著上升(P0.05),抑制凋亡Bcl-2蛋白表达显著下降(P0.05),而促进凋亡Bax、p53蛋白表达显著上升(P0.05)。不同浓度Klotho蛋白和高糖同时作用HUVECs时,细胞凋亡率逐渐降低(P0.05),抑制凋亡Bcl-2蛋白表达显著上升(P0.05),而促进凋亡Bax、p53蛋白表达显著下降(P0.05)。结论抗衰老Klotho蛋白能够抑制高糖诱导的HUVECs细胞衰老和凋亡,并通过诱导人端粒酶逆转录酶mRNA、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、p53蛋白表达发挥作用。
[Abstract]:Objective to study the inhibitory effect of anti-aging Klotho protein on apoptosis and aging of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by high glucose and its mechanism. Methods HUVECs cells were cultured and set up in group C (), L group with PBS medium of the same volume (), H group containing low concentration of 5.5 mmol/L glucose) (supplemented with high concentration of 33. 3 mmol/L glucose group). K1 group (supplemented with 0.1 渭 mol / L Klotho 33. 3 mmol/L glucose group), K2 group (containing 1 渭 mol / L Klotho 33. 3 mmol/L glucose group), K3 group (containing 10 渭 mol / L Klotho 33. 3 mmol/L glucose group), The senescence of HUVECs cells in each group was detected by SAA-尾-galactosidase staining for 48 h. The expression of human telomerase reverse transcriptase mRNA in HUVECs was detected by RT-PCR, the apoptosis rate of HUVECs in each group was detected by flow cytometry, and the expression of apoptosis-related protein p53, Bcl and Bcl-2 in HUVECs was detected by Western-blot assay. Results compared with PBS control group, the positive rate of SA- 尾-galactosidase staining in HUVECs cells in high concentration glucose group was significantly increased (P 0.05), and the expression of telomerase reverse transcriptase mRNA was significantly decreased (P 0.05). When HUVECs was treated with different concentrations of Klotho protein and high glucose at the same time, the positive rate of SA- 尾-galactosidase staining decreased gradually (P 0.05), and the expression of telomerase reverse transcriptase mRNA increased gradually (P 0.05). In the high concentration glucose group, the apoptosis rate of HUVECs cells was significantly increased (P 0.05), the expression of Bcl-2 protein was significantly decreased (P 0.05), and the expression of apoptosis Bax,p53 protein was significantly increased (P 0.05). When HUVECs was treated with different concentrations of Klotho protein and high glucose at the same time, the apoptosis rate decreased gradually (P 0.05), the expression of Bcl-2 protein increased significantly (P 0.05), while the expression of Bax,p53 protein decreased significantly (P 0.05). Conclusion Anti-aging Klotho protein can inhibit the senescence and apoptosis of HUVECs cells induced by high glucose, and inhibit the expression of Bax,p53 protein by inducing the expression of human telomerase reverse transcriptase mRNA,Bcl-2 protein.
【作者单位】： 三峡大学仁和医院ICU科;三峡大学仁和医院心血管内科;
【基金】：湖北省教育厅自然科学研究计划重点项目(编号:D20091308)
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：2476393