重组表位疫苗的制备及免疫学活性研究

发布时间：2019-07-02 21:15

【摘要】： 重组表位疫苗(Recombinant epitope vaccine)研制和开发过程主要包括构建表达、制备及活性研究等几个阶段。围绕以上三个方面,针对重组表位疫苗CZ-1、HSP65-MUC1和HSP65-HER2进行了以下研究:1、使用分子生物学软件对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的VP1上的B细胞表位和Th细胞表位进行了多参数预测,根据预测结果在大肠杆菌内构建表达了由相同B细胞表位及Th细胞表位以串联模式组成口蹄疫重组表位疫苗CZ-1,采用层析法纯化、复性后,对其免疫豚鼠后产生中和抗体的滴度进行了测定;2、解决了HSP65-MUC1的降解问题,建立了重组表位疫苗HSP65-MUC1的实验室规模纯化工艺,并将纯化工艺放大至中试规模后,且对纯化后的HSP65-MUC1原液冻干品进行了一系列的质量检测;3、表达并纯化了重组表位疫苗HSP65-HER2,采用小鼠B16/HER2黑色素瘤的腹腔荷瘤动物模型研究其生物学活性,并对其作用机制进行了初步探索。 本研究的意义在于,构建、表达、纯化获得了重组表位疫苗CZ-1,并对其生物学活性进行了研究,证实其有望开发成预防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗,并为其他同类型的重组表位疫苗的开发提供了思路;解决了HSP65-MUC1在制备过程中易降解的技术难题,建立了HSP65-MUC1的中试工艺,为进一步临床试验及商业化应用建立了坚实的基础;通过小鼠体内抑瘤实验,证实了HSP65-HER2与CpG ODN联合应用对HER2阳性肿瘤细胞生长抑制作用,为进一步的研究奠定了基础。
[Abstract]:The research and development of recombinant epitope vaccine (Recombinant epitope vaccine) mainly includes construction, expression, preparation and activity research. Around the above three aspects, the following studies were carried out on recombinant epitope vaccines CZ-1,HSP65-MUC1 and HSP65-HER2: 1. The B cell epitopes and Th cell epitopes on VP1 of Asia type I foot-and-mouth disease virus were predicted by molecular biology software. According to the predicted results, the recombinant epitope vaccine CZ-1, composed of the same B cell epitope and Th cell epitope was constructed and expressed in E. coli. After purification by chromatography and renaturation, the titer of neutralizing antibody produced by immunizing guinea pigs was determined. 2. The degradation problem of HSP65-MUC1 was solved, and the laboratory scale purification process of recombinant epitope vaccine HSP65-MUC1 was established, and the purification process was enlarged to the pilot scale, and a series of quality tests were carried out on the purified HSP65-MUC1 freeze-dried products. 3. The recombinant epitope vaccine HSP65-HER2, was expressed and purified. The biological activity of the recombinant epitope vaccine HSP65-HER2, was studied in the abdominal cavity tumor-bearing animal model of mouse B16/HER2 melanoma, and its mechanism was preliminarily explored. The significance of this study is to construct, express and purify the recombinant epitope vaccine CZ-1, and study its biological activity, which proves that it is expected to be developed into a new type of vaccine to prevent Asia I FDMV infection, and provides ideas for the development of other recombinant epitope vaccines of the same type. The technical problems of easy degradation of HSP65-MUC1 in the preparation process were solved, and the pilot-scale test process of HSP65-MUC1 was established, which established a solid foundation for further clinical trial and commercial application, and confirmed the inhibitory effect of HSP65-HER2 and CpG ODN on the growth of HER2 positive tumor cells through in vivo tumor inhibition test, which laid a foundation for further research.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

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本文编号：2509241