HSV-1感染大鼠骨髓间充质干细胞及形成潜伏感染的初步研究

发布时间：2019-07-28 19:44

【摘要】：目的：在体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),建立骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件,探讨骨髓间充质干细胞的部分生物学特性,为进一步深入研究骨髓间充质干细胞的诱导分化和应用打下基础。用单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染大鼠骨髓间充质干细胞,观察单纯疱疹病毒1型感染大鼠骨髓间充质干细胞及在其上形成潜伏感染的情况,揭示单纯疱疹病毒1型对大鼠骨髓间充质干细胞的影响。方法：在无菌条件下,剥离大鼠股骨、胫骨,自大鼠股骨、胫骨抽取骨髓液,用淋巴细胞分离液分离骨髓间充质干细胞,分别采用常规培养液及含矿化液的培养液两组进行细胞培养,对第3代骨髓间充质干细胞进行酶动力学法碱性磷酸酶(ALP)含量检测及细胞钙结节茜素红染色,观察骨髓间充质干细胞在体外长期培养时钙结节形成情况,以此做骨髓间充质干细胞鉴定；用HSV-1感染骨髓间充质干细胞,观察病毒致细胞病变(CPE)；建立骨髓间充质干细胞的HSV-1潜伏感染模型。提取总DNA, PCR法扩增骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段,检测HSV-1感染骨髓间充质干细胞及潜伏感染。结果：两组骨髓间充质干细胞其培养液中的ALP含量不断升高,经过两独立样本t检验,矿化液诱导组第3,6,9天的ALP水平较正常对照组均明显升高(P0.05)。骨髓间充质干细胞经过14天矿化液诱导后,细胞表现出成骨细胞特性,在体外长期不传代培养时可形成钙结节。HSV-1感染大鼠骨髓间充质干细胞,出现典型的细胞病变(CPE), PCR法证实骨髓间充质干细胞内存在HSV-1的特异性片段。HSV-1潜伏感染的骨髓间充质干细胞,未出现明显的细胞病变(CPE),骨髓间充质干细胞传至第7代,仍可测到HSV-1的基因片段,表明骨髓间充质干细胞有可能形成HSV-1的潜伏感染。结论：大鼠骨髓间充质干细胞在体外适当的培养条件下,增殖能力很强,可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。可以说骨髓间充质干细胞具有易获得、易培养、低免疫原性、易于外源基因的转入和表达等特性,已成为具有细胞治疗和基因治疗临床疾病潜在实用价值的有效载体。HSV-1可以在体外感染大鼠骨髓间充质干细胞并有形成潜伏感染的趋势。本实验对在临床上应用骨髓间充质干细胞进行细胞移植、基因治疗及器官移植,指导临床用药,提高移植术后病人生活质量和生存率,可提供一定的依据。
【图文】：

图l贴壁第三天的BMSCsxl00图2贴壁第四天的BMSCs火100Fig.1BMSCseulturedforthirddayX100Fig.2BMSCseulturedforfourthdayx1OO

HSV-1感染大鼠骨髓间充质干细胞及形成潜伏感染的初步研究

3.诱导14d的BMSCs形态观察细胞加入矿化液诱导后生长较前明显减慢，逐渐变为立方形、锥形或梭形。诱导14d的BMScs，形态上呈现“铺路石状”，重叠生长呈“钙结节”样(见图5)。图5矿化液诱导14d后的BMSCs(x100) Fig.5BMSCsredueedbymineralizedliquidfor14thday4.钙结节茜素红染色结果茜素红染色是一种对钙质的特异性染色，BMSCS经矿化液诱导，，可形成钙
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R329

【参考文献】