人、猪鞭虫核糖体DNA及线粒体DNA遗传多样性的研究

发布时间：2019-08-08 06:31

【摘要】： 毛首鞭形线虫简称鞭虫,属于无尾感器纲(Aphasmidea)鞭尾目(Trichurata)鞭虫科(Trichuridae)鞭虫属(Trichuris),为人体和动物肠道常见的寄生线虫。据资料记载,猪鞭虫还可感染人体。随着生物种群的不断进化和发展,尤其对那些相似种或近缘种,寄生虫的形态学鉴定越来越显出它的局限性。尤其是近几年,PCR技术在寄生虫的分子分类学、分子遗传学、种(株)鉴定等方面的研究已取得了很大的成功,如以PCR扩增反应为基础的限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)及单链构象多态性(SSCP)分析等。 本研究首次对来源于中国不同地方不同宿主鞭虫的间隔区序列(internal transcribed spacer,TS)以及线粒体(mtDNA)基因大亚基(lsrRNA)、NADH脱氢酶亚单位Ⅳ基因(nad4)进行PCR扩增、克隆及序列分析。结果,猪鞭虫ITS-1序列长为655-661bp,ITS-2序列长为530-538 bp;人鞭虫ITS-1序列长为600-627bp,ITS-2序列长为468-486 bp;二者的5.8S序列长均为154bp。其中,猪鞭虫与西班牙猪鞭虫ITS-1序列的差异碱基有14个,差异率为2.1%;ITS-2序列的差异碱基有18个,差异率为3.4%:5.8S序列的种(株)内差异碱基有1个,差异率为0.6%。人鞭虫ITS-1序列的种(株)内差异碱基有34个,差异率为5.4%;ITS-2序列的种(株)内差异碱基有30个,差异率为6.4%。猪鞭虫ITS-1序列的种(株)内差异碱基有15个,差异率为2.3%;ITS-2序列的种(株)内差异碱基有13个,差异率为2.4%。人鞭虫与猪鞭虫ITS-1序列的碱基差异率达45.1%,ITS-2序列的碱基差异率达74.7%,5.8S序列的差异碱基有6个差异率达3.9%。在猪鞭虫可见微卫星重复序列(ITS-1:AGC,CGC;ITS-2:GCT,CG,C),人鞭虫(ITS-1:CAG,GGC;ITS-2:CAG,CGA,CGG,GCG)。剔除ITS-1、ITS-2序列中的微卫星重复序列后,人鞭虫ITS-1序列的种(株)内差异碱基有10个,差异率为1.7%;ITS-2序列的种(株)内差异碱基有5个,差异率为1.1%。猪鞭虫ITS-1序列的种(株)内差异碱基有9个,差异率为1.4%;ITS-2序列的种(株)内差异碱基有9个,差异率为1.8%。 从GeneBank数据库下载Trichinella spiralis的ITS-2基因片段作为外群(accession number:AY851266),相关鞭虫的ITS-2基因片段(Trichuris.ovis,AJ238220;T.leporis,AJ251321;T.skrjabini,AJ489248;T.vulpis,AM234616;T.arvicolae,AJ310661;T.muris,AJ299407),采用PHYLIP(version3.67)的距离法(邻接法)以及PAUP(version 4.0b4a)的最大简约法,一齐进行进化树分析。 结果显示,rDNA的ITS-1序列的PCR-RFLP差异性分析以及ITS-2序列作为分子遗传标记的遗传进化树关系分析图显示,能有效区分鞭虫属内的各种(株),并且结果显示人鞭虫与猪鞭虫遗传距离最为接近。这些研究结果有助于鞭虫的生活史、传播途径、流行病学、种群遗传学的研究和其相关疾病的诊断,为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。
【图文】：

2.1PCR扩增结果16个样品均成功地扩增出约150obP的ITs片段，与预期目的片段长度相符，，且无非特异性条带，空白对照与宿主对照均为阴性。代表性样品ITS基因片段的PCR产物电泳图见图1。bp2000翻八lnnUnUU比门曰

本文编号：2524198