DDAH2启动子甲基化介导同型半胱氨酸促内皮细胞凋亡的作用及EGCG对其作用的影响

发布时间：2019-09-12 20:55

【摘要】： 研究背景：同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)可通过诱导内皮细胞凋亡而促进动脉粥样硬化的发生发展。研究提示,内源性非对称二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine, ADMA)升高所诱导的氧化应激介导了Hcy的作用。ADMA是一种主要的内源性NOS抑制物,能竞争性抑制NOS活性,减少NO合成。二甲基精氨酸二甲氨水解酶(Dimethylarginine dimethylaminohydrolase, DDAH)能特异性水解ADMA。DDAH有1、2两种亚型,其中DDAH2主要分布于内皮及血管组织。研究表明,DDAH/ADMA通路介导的内皮细胞凋亡是多种疾病的病理基础。 近来研究提示,DNA甲基化是AS的早期标志,并与内皮细胞功能密切相关。且DNA甲基化在调节DDAH表达中起关键作用。 表没食子儿茶素-3-没食子酸(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)为多酚类物质,是绿茶的主要活性成分,具有抗氧化、抗炎等多种活性。最新研究发现,EGCG可抑制癌细胞中DNA甲基转移酶(DNMTs)活性并可重新激活癌细胞中的甲基化沉默基因,从而起到抑制癌症进展的作用。 目的：观察Hcy对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)凋亡的影响是否与诱导DDAH2基因启动子的甲基化进而降低其表达有关。同时确定EGCG对HUVECs凋亡的保护作用是否与抑制DNMT1的表达进而抑制Hcy诱导的DDAH2高甲基化有关。 方法：HUVECs活性及细胞凋亡率分别用MTT法和流式细胞仪法检测；DDAH2表达水平通过实时定量PCR检测,DDAH2启动子甲基化程度通过甲基化PCR检测(methylation-specific PCR, MSP),并通过Western blot检测DNMT1的蛋白表达水平。 结果：Hcy可降低HUVECs活性并诱导其凋亡。同时,Hcy可呈剂量依赖性(0.3 to 3.0 mM)抑制DDAH2 mRNA表达,同时伴有DNMT1蛋白的表达水平显著上调以及DDAH2基因的启动子区域的高甲基化。DNMT抑制剂5-Aza或者EGCG可显著抑制Hcy的上述作用。 结论：Hcy呈剂量依赖性抑制HUVECs的活性并诱导HUVECs凋亡。此种作用与其上调DNMT1表达进而诱导DDAH2启动子高甲基化使其表达降低有关。EGCG可抑制Hcy的上述作用。这些结果阐述了Hcy致动脉粥样硬化的新机制,为预防和治疗动脉粥样硬化提供了新的思路。
【图文】：

Contrd 1.0.西 111七y图2一 1EGeG(20林M)或s一Aza(5林M)对 Hcy(1.0mM)诱导的细胞凋亡的影响 A:AmiexioVFITC用I双染色检测细胞凋亡:门)Control组 :(2)1.0n1MHey处理组 :(3)1.olnMHey+20叫 MEGCG:(4)1.omMHcy+5阔MS一Asa。B:Annexin一 VFITC于I双染色后用流式细胞仪分析结果。Mean士SEM，，n=3，*:尸<0.05，与空白对照组相比，#:尸<0.05，与Hey处理组相比。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R341

【引证文献】

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1 龚婷;冠心病患者DDAH2启动子甲基化对内皮祖细胞功能的调节及机制[D];中南大学;2012年

本文编号：2535339