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体外诱导兔骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的研究

发布时间:2019-09-26 10:55
【摘要】: 目的探讨在体外诱导兔骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的的有效方法,以便为后续实验工作提供稳定的种子细胞来源。 方法以密度梯度离心法自兔骨髓液获取骨髓间充质干细胞进行原代及传代培养,观察其形态学变化并鉴定。以5-氮杂胞苷、平滑肌细胞培养上清液诱导及与平滑肌细胞共培养诱导等方法诱导其向平滑肌细胞分化,通过形态学观察及免疫组化方法比较各种诱导方法的诱导效率。 结果原代培养的兔骨髓间充质干细胞形态较为均一,呈成纤维细胞样,生长增殖迅速,传代培养生长良好。培养的细胞经流式细胞仪鉴定,CD34及CD45表达很弱、而CD90强表达,证明所培养的细胞为较纯的骨髓间充质干细胞。在各组诱导实验中,以5-氮杂胞苷诱导及共培养诱导联合处理组诱导组效率最高,单纯共培养诱导组与5-氮杂胞苷诱导及上清液诱导联合处理组次之,二组诱导率无显著差异,单纯以上清液诱导组效率最低。 结论密度梯度离心结合贴壁筛选能获得较纯的骨髓间充质干细胞。5-氮杂胞苷及共培养诱导联合处理能有效地诱导其向平滑肌细胞分化。
【图文】:

示意图,密度梯度离心法,示意图,血浆层


操作轻柔,,避免冲散分离液面,或与分离液混合而影心 30min,离心后管内液体分为三层,上层为血浆层,离液层,底层为红细胞和多核白细胞层,在上层与中见呈白色的薄雾状的单个核细胞层(图 2.1)。以毛细周缘吸尽该层面的单个核细胞,可多吸些血浆层,但移入另一离心管骨,再加入 4 倍于其体积的 PBS 与之 10 min,吸去上清液,保留离心管底部约 1ml 液体,重含 10%胎牛血清的 DMEM-LG 培养基(添加青霉素ml)重悬细胞沉淀,充分混匀后,以血细胞计数板计4/ml 接种于 25cm2培养瓶中,静置于 37℃、5%CO2培

生长曲线,生长曲线,倒置显微镜


1兔BMMSCs生长曲线
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R329

【引证文献】

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1 李亚楠;阴道上皮细胞体外诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的研究[D];河北医科大学;2013年



本文编号:2542103

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