重组乙肝表面S抗原在CHO-K1细胞中的表达、克隆筛选

发布时间：2019-10-30 06:11

【摘要】： 乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的全球性传染病。HBV除了引起急性肝炎外,还可导致慢性肝炎和肝硬化,而且与肝癌的发生有着密切的关系。 曾在国内外广泛用于乙型肝炎预防的血源性乙肝疫苗(PDV)因血源供应有限和潜在危险性,己经逐步被基因工程疫苗所代替。中国仓鼠卵巢癌细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)经基因转染后分泌的重组乙肝表面S抗原,和乙肝病人血清来源的抗原同样具有系统的抗原活性,而且在灵长类动物的实验中发现CHO细胞重组乙肝抗原比血清抗原和酵母来源的抗原具有更高的免疫活性,表现为产生更多的抗体和更高的血清滴度。 本课题主要内容是建立CHO-K1细胞基因转染乙肝表面S抗原基因的方法,并筛选出稳定表达的CHO细胞株。首先采用分子生物学的方法制备了转染级别的包含乙肝表面S抗原基因的两种质粒pS-1和pcDNA-s-1。然后,用两种转染方法分别转染COS-1细胞和CHO-K1细胞,并用ELISA的方法对转染结果进行检测。经过实验得知,磷酸钙转染法本身受其它很多因素影响且很大,转染方法不稳定;PEI转染法可以有效的转染细胞,实验稳定结果较好,并且确定了最佳的PEI/DNA的质量比为6.7。本实验还对PEI的毒性进行了测定,发现它对CHO-K1细胞毒性不大,细胞存活最少的也有76.01%存活。最后,确定了G418的最佳筛选浓度为600ug/ml后,用PEI转染法转染CHO-K1细胞,经G418加压筛选后,用酶联和透射电镜检测均得到细胞可稳定表达乙肝表面抗原的结论。在本课题中,成功的构建了稳定表达乙肝表面S抗原的CHO细胞株6H3。
【图文】：

图 1-1 电镜图片：左侧是放大的两个核衣壳 图 1-2 电镜图片：乙肝表面抗原颗（箭头所指），右侧是乙肝病毒颗粒。Fig.1-1 EM pic: HB virions (right) and enlargements Fig.1-2 EM pic: HBsAg partices (twoof the two exposed cores (indicated by arrows). forms: filamentous and sphericaHBV DNA的基因组约含3200个碱基对。长链的长度固定，有一缺口（

图 1-1 电镜图片：左侧是放大的两个核衣壳 图 1-2 电镜图片：乙肝表面抗原颗（箭头所指），右侧是乙肝病毒颗粒。Fig.1-1 EM pic: HB virions (right) and enlargements Fig.1-2 EM pic: HBsAg partices (twoof the two exposed cores (indicated by arrows). forms: filamentous and sphericaHBV DNA的基因组约含3200个碱基对。长链的长度固定，，有一缺口（
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

【参考文献】

相关期刊论文 前8条

1 刘水渠;;乙肝病毒抗原抗体的若干研究状况[J];浙江临床医学;2006年11期

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3 张庶民 ,马霄 ,侯启明 ,梁争论 ,雷殿良 ,王安绪 ,马玉珍 ,陈庚军 ,魏顺远 ,杜恩慧 ,王鹏富 ,崔玉梅 ,于洪涛 ,裴晓春 ,刘志强;吸附百白破乙肝(CHO)四联疫苗接种反应及血清学效果观察[J];中国生物制品学杂志;2004年05期

4 要e

本文编号：2553766