人脐带血和外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定

发布时间：2019-11-10 09:17

【摘要】： 脑卒中是一类具有高发病率、高致残率及高死亡率特点的疾病,迄今为止,尚缺乏有效的防治措施。内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是存在于胎肝、脐带血和成人外周循环血中的、能够分化为内皮细胞的多潜能细胞。研究表明内皮祖细胞参与缺血性脑卒中后新生血管的形成、修复损伤的内皮、促进神经再生,在防治支架术后血栓形成及官腔再狭窄,以及构建组织工程微血管网络方面具有广泛的应用前景。我们实验立足于临床,研究人脐带血(umbilical cord blood,CB)、外周血(peripheral blood,PB)EPCs的分离、培养和鉴定,为EPCs在缺血性脑卒中的临床应用提供技术支持。实验选取人脐带血外周血各15ml,采用1.077 Ficoll-Paque密度梯度离心法获得单个核细胞(monocytes,MNCs),联合贴壁筛选法进行纯化,用含VEGF的M199培养基对MNCs进行诱导培养。观察细胞的生长特性,从形态学、免疫细胞化学、免疫荧光、流式细胞学及吞噬摄取实验五方面对细胞进行鉴定。体外培养的EPCs先后出现“血岛”样细胞集落、首尾相连条索样、网状及鹅卵石样形态,流式细胞学检测细胞表达祖细胞表面标志CD34、CD133、CD105,培养第7d的细胞高度表达内皮系细胞特异性标志KDR及CD31,加之细胞吞噬乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL),胞膜结合荆豆凝集素-1(UEA-1),进一步证明我们获得了EPCs。随着自体细胞治疗和基因修饰的进展,EPCs成为血管相关性疾病的种子细胞,我们从脐带血和外周血中成功分离出了EPCs,以期为缺血性脑卒中患者自体内皮祖细胞回输及临床干细胞库的建立提供理论及技术支持。
【图文】：

骨髓微环境,血管区,祖细胞

图2.1 MMP-9促进mKitL向sKitL 转化，，cKit阳性祖细胞从骨髓微环境血管区迁移，这种易位激活EPCs由休眠进入增殖状态。图片摘自ov M, Erl W, Weber PC. Endothelial Progenitor Cells Mobilization, DifferentiaArterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2003,23:1185-1189.acental growth factor，PlGF）和激素类[21-22]如雌激素、促红细胞生员具有相同的调节作用。此外，他汀类药物通过活化Akt信号通路Cs参与新生血管生成[23-26]。EPCs一旦受到动员，就会从骨髓的血中。EPCs 参与新生血管生成和内皮细胞更新的机制传统观念认为成人体内新生血管的形成只有血管新生（angiogen已有血管处芽生出新的毛细血管，EPCs的成功鉴定改变了我们对识，EPCs可以选择性募集到受损或缺血组织区，在以前未存在血

血管发生,血管新生

植入体内的EPCs可能通过释放细胞因子促进成熟内皮细胞的增殖迁移，进而增强其血管生成能力。图2.2 血管新生（左）与血管发生（右）血管新生由已存在的原位血管内皮细胞增殖迁移形成血管结构；血管发生是在一系列细胞因子作用下由骨髓EPCs动员到循环血中并募集到缺血损伤部位，增殖分化迁移参与形成血管结构。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

【参考文献】