中国大陆日本血吸虫不同地理株对吡喹酮敏感性比较及其蛋白质组学差异分析

发布时间：2019-11-26 14:43

【摘要】： 血吸虫病是由血吸虫感染引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。我国是日本血吸虫病流行区,该病曾流行于我国长江流域及以南的12个省(市、自治区)。经过近60多年的努力,通过查螺灭螺、查病治病,改水改厕及改造环境等综合措施,疫情得到了有效的控制。但目前,我国仍有7个省(市、自治区)有血吸虫病流行。血吸虫化疗是治疗血吸虫病和控制传播的一项重要的手段。尤其是高效低毒治疗药物吡喹酮的广泛应用,在血吸虫防治中起到了关键性的作用。但是由于在中、高度流行区服用吡喹酮面广量大,随着同一易感人群反复服用吡喹酮频率的增加,以及在实施全民化疗中服用吡喹酮剂量不足的几率相对增多,日本血吸虫会否对吡喹酮产生抗药性已引起了人们的广泛关注。日本血吸虫不同地理株对吡喹酮敏感性的调查及其机制研究对吡喹酮抗性监测及预防具有重要意义。 本文针对采自中国江苏、江西、湖南3个地理株血吸虫成虫开展了如下研究工作: 1中国大陆日本血吸虫不同地理株成虫对吡喹酮敏感性比较 1.1目的:探索日本血吸虫中国大陆不同地理株成虫对吡喹酮敏感性是否存在差异。 1.2方法:用3个不同地理株的血吸虫尾蚴感染小鼠,感染35d后按分组不同分别给予31.25mg/kg×3d、62.5mg/kg×3d、125mg/kg×3d、250mg/kg×3d及500mg/kg×3d剂量吡喹酮给药。给药后15d解剖感染小鼠,计算各组减虫率,并计算不同地理株血吸虫吡喹酮的ED50值。 1.3结果:利用graphpad prism 5应用软件拟合出的剂量-反应关系的S形曲线,计算出3个地理株日本血吸虫吡喹酮半数有效致死剂量(ED50),江苏株为68.87mg/kg,95%置信区间为60.51～78.38mg/kg;江西株为133.3mg/kg, 95%置信区间为112.5～157.8mg/kg;湖南株为84.18mg/kg, 95%置信区间为73.98～95.78mg/kg。 1.4结论:中国大陆日本血吸虫不同地理株对吡喹酮的敏感性存在明显差异,其中江西株血吸虫对吡喹酮的敏感性最低。 2中国大陆日本血吸虫不同地理株成虫蛋白质组学差异分析 2.1中国大陆日本血吸虫不同地理株成虫可溶性蛋白组分的双向电泳分析 2.1.1目的:比较中国大陆日本血吸虫不同地理株间成虫蛋白质组学差异 2.1.2方法:用3个不同地理株的血吸虫尾蚴感染家兔,然后收集雌、雄成虫,分别制备成虫可溶性蛋白,经固相pH梯度双向凝胶电泳分离。凝胶银染并用PDQuest 8.0凝胶图像分析软件进行比较分析,筛选出差异表达蛋白点。 2.1.3结果:湖南株、江西株和江苏株雄虫分别检出698±10,650±19,629±23个蛋白点,雌虫分别检出670±12,682±22,625±28个蛋白点,其中约90%蛋白点分子量处于20～90KD范围内,蛋白等电点分布在5～8之间。不同地理株雌虫与雄虫分别进行两两比较,雄虫共发现14个差异点,其中湖南、江苏株各有一个独立表达蛋白点,江西株有1个未表达点,以江苏株为基准另外的 11个蛋白点或表达上调或表达下调;雌虫发现18个差异点,其中江苏株1个独立表达点,湖南株1个未表达点,以江苏株为基准另外的16个蛋白点或表达上调或表达下调。 2.1.4结论:中国大陆日本血吸虫不同地理株间成虫蛋白质表达存在差异。 2.2不同地理株成虫可溶性蛋白差异点的质谱鉴定 2.2.1目的:鉴定差异表达蛋白与功能分析。 2.2.2方法:切取二维电泳凝胶上的差异表达蛋白点酶解,采用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱仪对酶解所得肽段进行鉴定,同时结合生物信息学对所鉴定的蛋白进行功能分析。 2.2.3结果:选取22个差异表达蛋白点进行质谱鉴定分析,对10个蛋白斑点进行了肽指纹图谱的测定,包括7个雄虫差异表蛋白及3个雌虫差异表达蛋白。根据谱图的参数,鉴定结果显示7个雄虫差异表达蛋白点分别为: SJCHGC00821 protein、SJCHGC00475 protein、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)、谷胱甘肽转移酶片段(glutathione transferase)、谷胱甘肽-S-转移酶( Glutathione S-Transferase )、D-核酮糖-5-磷酸-3-表异构酶(D-ribulose-5-phosphate 3-epimerase)、G蛋白α亚基AgGq1(G protein alpha subunit AgGq1);3个雌虫表达蛋白分别为:预测蛋白(predicted protein)、GAF型传感器信号转导组氨酸激酶(GAF sensor signal transduction histidine kinase)、组织蛋白酶B样半胱氨酸蛋白酶前体(Cathepsin B-like cysteine proteinase precursor)。 2.2.4结论:所鉴定的10个差异蛋白主要与蛋白翻译后修饰、蛋白代谢、糖代谢、信号转导、细胞调控及能量代谢等过程相关。部分蛋白表达差异与虫体吡喹酮敏感性密切相关,有待进一步深入研究。
【图文】：

图 1. 血吸虫采集地点图示Fig1. Schistosome collecting site1.2 试剂吐温 80、羧甲基纤维素 300-800(CMC)、氯化钠：国药集团化学试剂有限公司。二甲基亚砜(DMSO)：宜兴市第二化学试剂厂生产。吡喹酮(PZQ)：Sigma 公司产品。1.3 仪器SZ60 解剖镜： 日本 OLYMPUS 公司产品。37℃孵化温箱： 德国 MMM 公司产品。

1 各用药组减虫率间比较3个地理株的不同用药组其残存虫体数及其减虫率如表1，不同用药组血吸虫残存数量随着吡喹酮剂量的增加而减少（图2.A）；减虫率随着吡喹酮用药量的增加而增加，在剂量最高的500mg/kg组，3个地理株日本血吸虫减虫率均超过98%，而且3个地理株的趋势一致（图2.B）。在31.25mg/kg组，江苏株、湖南株、江西株减虫率分别：20.23%、10.96%、0%，江苏株与湖南株减虫率之间差异无统计学意义(p>0.05)；江苏株与江西株减虫率之间差异具有高度统计学意义(p<0.01)；江西株与湖南株之间差异具有高度统计学意义(p<0.01)。在62.5mg/kg组，江苏株、湖南株、江西株减虫率分别：45.07%、43.12%、20.78%，，江苏株与湖南株减虫率之间差异无统计学意义(p>0.05)；江苏株与江西株减虫率之间差异具有高度统计学意义(p<0.01)；江西株与湖南株之间差异具有高度统计学意义(p<0.01)。在125mg/kg组
【学位授予单位】：江苏省血吸虫病防治研究所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R383

【引证文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 胡奇丰;环孢素A体内抗日本血吸虫的实验研究[D];宁波大学;2012年

本文编号：2566179