小鼠着床前胚胎miR-125a,miR-295和miR-181b表达的实验研究

发布时间：2020-01-18 08:07

【摘要】：微小RNA是一类单链非编码RNA,大约20-25个核苷酸的长度,在线虫到人类的真核生物中广泛存在。miRNA具有高度的保守性、组织特异性和时序性;生成miRNA的基因并不是随机分布的,从同一个前体RNA加工而来的共表达miRNA存在基因簇集现象。成熟的miRNA通过其5’端的5-8个核苷酸,识别并与目标特异性基因进行不完全互补配对或者完全互补配对,引起目标特异性基因的转录产物的降解或者诱导翻译抑制,从而来调控目的基因的表达。miRNA通过上述的作用原理在基因调控网络中发挥着重要的作用,并且还在对生物体的个体发育、细胞增值、凋亡、分化以及肿瘤的发生等许多方面的研究上具有重要的意义。 本课题开展miRNA-125a、miRNA-295、miRNA-181b在小鼠着床前胚胎表达的研究,分析miRNA在着床前胚胎生长发育、细胞分化等方面可能起到的作用。 目的:建立小鼠的超排、交配和胚胎收集系统,研究miRNA-125a、miRNA-295、miRNA-181b在小鼠着床前胚胎的表达,探讨miRNA在着床前胚胎发育和细胞分化中的作用和意义。 方法:采用miRNA特异RT引物进行反转录,采用SYBR Green实时定量PCR技术,研究miR-125a、miR-295和miR-181b在小鼠着床前胚胎发育过程中表达水平的变化。 结果:着床前胚胎发育的各阶段均表达miR-125a、miR-295和miR-181b;随着胚胎的发育,miR-295的表达呈逐渐上升的趋势;miR-125a在卵母细胞到2细胞发育阶段呈下降趋势,以后随发育进程呈逐渐上升趋势。 结论:miRNA在小鼠着床前胚胎中表达,其可能对着床前胚胎的发育和分化过程起到调控作用。
【图文】：

在植物模式中，，miRNA的加工、成熟过程全部是在细胞核内完成的，这个过程没有Drosha的参与；在动物模式中，miRNA的生物合成过程相对植物模式的要复杂，主要包括下面四个阶段（如图1）：①基因的转录；②原始转

和一个 dsRBD 区域（见图 2）。Dicer图2 微小RNA的生物合成相关基因的结构RNase Ⅲ类核酸酶可以将pre-miRNA切割形成21个核苷酸的单链miRNA，其切割方式为不对称切割，这是与小干扰RNA 是不同的。Dicer对茎环前体一端5＇磷酸，一端3＇端两个悬垂的结构有特殊亲和力，在Dicer 进一步的作用下，miRNA前体被剪切成20~25个核苷酸长度的双链miRNA。多数miRNA 来自3′端,少数来自 5′端， pre-miR-16-1 、pre-miR-18 已经被证实是由 5′端加工而来的；pre-miR-19a 、pre-miR-25 由 3′端加工而来；pre-miR-17 则来自 5′和 3′端[24]。成熟 miRNA 与其互补序列互相结合成所谓 miRNA：miRNA* 双螺旋结构(miRNA* 是miRNA 的互补序列)； 随后，在解旋酶的作用下，双螺旋解旋，其中miRNA 链结合到RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)中
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R321

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本文编号：2570776