CpG-ODN的免疫增强功能和安全性研究

发布时间：2020-02-04 20:59

【摘要】： 目的 通过将乙肝表面抗原和CpG-ODN单独或联合免疫BAL b/c小鼠,观察小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平及其脾脏的组织形态学改变,评价CpG-ODN在小鼠全身和脾脏局部产生的免疫学效应,探讨CpG-ODN的免疫增强功能和可能的安全性问题;并进一步体外观察经乙肝表面抗原与CpG-ODN单独或联合体外刺激后小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性的动态改变,评价CpG-ODN对乙肝表面抗原的免疫增强功能,进而探讨CpG-ODN是否可以作为乙肝表面抗原的免疫佐剂。 方法 将CpG-ODN质粒转化大肠杆菌DH5α,涂布于氨苄平板37℃培养,挑取若干菌落于37℃小量液体培养,碱裂解法抽提质粒,酶切电泳鉴定;将鉴定成功菌落扩大培养,用去内毒素质粒大量抽提试剂盒抽提质粒,紫外分光光度法鉴定质粒的含量和纯度。BAL b/c小鼠随机分成五组:HBsAg和高剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg与CpG-ODN中剂量组、HBsAg和低剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg单用组和生理盐水对照组,分别于第0、2、4周免疫BAL b/c小鼠。于第1-8周断尾采血,ELISA法检测小鼠外周血中HBsAb和IFN-γ的水平;于第9周取脾,分离小鼠脾淋巴细胞,并分别用ConA和HBsAg体外刺激培养24h,XTT/PMS法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活性;同时制备小鼠脾脏组织的石蜡切片,HE染色法观察小鼠脾脏组织形态学改变。通过设立ConA组、HBsAg组、HBsAg与CpG-ODN联用组、HBsAg与pUC18联用组、CpG-ODN组、pUC18组、细胞空白对照及培养基空白对照组, XTT/PMS法评价HBsAg和/或CpG ODN对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。 结果 CpG-ODN质粒的含量为3.75mg,OD260/OD280比值为1.77。HBsAg和高剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg和中剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg和低剂量CpG-ODN联合免疫组的HBsAb水平均显著高于HBsAg单用组(p0.05);HBsAg和高剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg和中剂量CpG-ODN联合免疫组的IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖活性均显著高于HBsAg单用组和生理盐水对照组(p0.05)。HE染色提示,与HBsAg单用组和生理盐水对照组相比,HBsAg和高剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg和中剂量CpG-ODN联合免疫组、HBsAg和低剂量CpG-ODN联合免疫组的小鼠脾脏的白髓、红髓界限清晰,白髓中的动脉周围淋巴鞘增厚,脾小体数量增多,体积增大,脾小体可见明显的生发中心;红髓充血明显,脾索和脾血窦界限模糊。相对而言,HBsAg和CpG-ODN高、中剂量组的小鼠脾脏的动脉周围淋巴鞘较厚,脾小体体积较大,而HBsAg和低剂量CpG-ODN联合免疫组小鼠脾脏红髓充血较为明显。HBsAg和高剂量CpG-ODN联合免疫组的小鼠脾脏组织结构尚清晰完整,未观察到脾小体结构形态的异常。XTT/PMS检测发现,CpG-ODN最适终浓度是5-10μg/mL;最适刺激培养时间为72h。 结论 CpG-ODN可以明显地提高小鼠产生针对乙肝表面抗原的体液免疫和细胞免疫应答水平;高剂量的CpG-ODN冲击并未诱发小鼠脾脏产生严重的免疫损伤;CpG-ODN能够显著增强HBsAg对小鼠脾脏淋巴细胞的刺激作用,可以作为乙肝表面抗原有效的免疫佐剂。
【图文】：

)；无论ConA或HBsAg刺激，HBsAg和中剂量CpG-ODN联合免疫 CpG-ODN 联合免疫组之间均无统计学差异(p>0.05)。经 ConA低剂量 CpG-ODN 联合免疫组的淋巴细胞增殖活性与 HBsAg 单用组之间相比均有显著性差异(p<0.05)，而 HBsAg 单用组和生理盐水学差异(p>0.05)；经 HBsAg 刺激后，，HBsAg 和低剂量 CpG-ODN 联用组与生理盐水对照组之间的淋巴细胞增殖活性，两两比较均无统脾脏组织形态学观察观察小鼠脾脏组织形态学改变如下：

图 2.6 HBsAg 和中剂量 CpG-ODN 联合免疫组小鼠脾脏 HE 染色(10X)注：CA：中央动脉；PLS：动脉周围淋巴鞘；SC：脾小体；RP：红髓atoxylin-eosin staining of spleens of mice immunized with HBsAg and the mof CpG-ODN (10X)A: central antery; PLS: periarterial lymphatic sheath; SC: splenic corpuscle; RP
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

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本文编号：2576427