应激海马损伤相关蛋白质的比较蛋白质组学研究

发布时间：2020-02-13 14:16

【摘要】： 目的:观察慢性应激后大鼠海马蛋白质表达情况,探索应激致海马损伤的相关蛋白质。方法:将成年雄性Wistar大鼠束缚3周建立慢性应激动物模型,提取海马组织蛋白质。将对照组和应激组海马总蛋白进行双向凝胶电泳分离,通过比较对照组和慢性应激组大鼠海马蛋白质的2-DE谱图,寻找束缚应激导致的差异表达的蛋白点。将差异表达的蛋白点进行MALDI-TOF质谱分析和数据库检索鉴定。采用western blot方法对差异表达蛋白α-突触核蛋白(α-Synuclein)和动力蛋白1 (Dynamin1)表达情况进行验证,并通过荧光定量PCR技术对其mRNA水平进行检测。通过检测不同应激强度大鼠海马LTP以及细胞模型中FM1-43荧光染色情况的变化对动力蛋白1在应激致海马损伤中的功能行了初步探讨。结果:建立了高重复性和高分辨率的大鼠海马蛋白质2-DE方法。通过比较正常和应激后海马蛋白表达谱,发现14个蛋白点含量发生变化;其中2个蛋白点表达升高,12个蛋白点表达降低,并利用质谱技术鉴定出其中的11个蛋白点。Western blot方法检测到差异表达蛋白α-突触核蛋白(α-Synuclein)和动力蛋白1 (Dynamin1)在束缚应激后的海马中表达量确实降低,进而验证了2-DE结果。荧光定量PCR结果显示,α-突触核蛋白(α-Synuclein)和动力蛋白1 (Dynamin1) mRNA水平在束缚应激后分别降低到正常组的1/5和1/4。随着束缚时间的延长大鼠海马LTP明显的下降,而动力蛋白1的表达量也有明显下降趋势。细胞模型中,糖皮质激素使Dynamin1表达量降低并且神经元的囊泡内吞作用明显减弱。结论:慢性应激使大鼠海马蛋白质的表达发生变化,经质谱鉴定出其中11个差异蛋白质。其中动力蛋白1在应激过程中表达水平的下降可能通过阻碍突触囊泡循环障碍而致LTP和学习记忆功能衰退。
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R341

【参考文献】