破血化瘀、填精补髓法对实验性脑出血大鼠NF-κB信号通路作用机制研究

发布时间：2020-03-25 16:44

【摘要】：目的：本研究拟于大鼠脑出血模型上应用ELISA、免疫组化、RT-PCR等方法，研究破血化瘀、填精补髓法是否通过调节NF-κB信号通路减轻脑出血后的继发损伤机制，以论证破血化瘀、填精补髓法可以减轻脑出血后炎症反应和细胞凋亡，保护神经功能，促进脑组织损伤修复的假说，探索破血化瘀、填精补髓法治疗脑出血的机制。方法： 1.选择正常Wistar雄性大鼠，体重240g～260g，随机分为假手术组、脑出血模型组（模型组）、出血性中风方剂组（方剂组）、脑血康对照组（对照组），按照自体尾动脉血注射方法制备稳定的脑出血模型。 2.通过神经行为学评分、干湿重法、HE染色法观察破血化瘀、填精补髓法对实验性脑出血大鼠的神经功能缺损、脑含水量及血肿周围脑组织病理的干预效果。 3.应用ELISA法检测脑出血血肿周围脑组织的IL-1、IL-6、TNF-的表达变化。 4.应用免疫组化法和RT-PCR法检测NF-κB、TLR4、MyD88的蛋白表达及mRNA的变化。结果： 1.假手术组Longa评分为0分，方剂组和对照组与模型组比较可明显降低神经功能缺损评分（P0.05），其中方剂组功能恢复最为明显，与对照组比较存在显著差异（P0.05）。 2.模型组大鼠脑含水量较假手术组增加明显（P0.05），方剂组和对照组脑含水量与模型组比较下降明显，其中方剂组下降更为显著，与对照组比较存在显著差异(P0.05）。 3.模型组与方剂组和对照组HE染色均显示脑组织病理变化明显，3d时病理较5d时改变更显著，但方剂组和对照组的脑组织破坏较模型组大鼠轻。 4. ELISA法检测3d时血肿周围脑组织中IL-1、IL-6、TNF-含量，方剂组和对照组均低于模型组，存在显著差异（P0.05），方剂组降低IL-1、IL-6、TNF-能力与对照组比较，无显著性差异（P㧐0.05）。 5.脑出血后3d，NF-κB、TLR4、MyD88的表达一致。模型组与假手术组比较，模型组阳性细胞表达最强，数目最多，着色最深，呈棕褐色；对照组与方剂组阳性细胞中等强度表达，数目较少，着色为棕黄色；假手术组阳性细胞阳性表达较弱，着色为淡黄色，数目最少。其灰度值检测，各组与模型组比较有极显著性差异（P0.01），方剂组与对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）。 6. RT-PCR检测，NF-κB、TLR4、MyD88的表达一致。模型组与假手术组相比，NF-κBmRNA、TLR4mRNA、MyD88mRNA水平明显增高（P0.01）；方剂组和对照组与模型组相比，NF-κB mRNA、TLR4mRNA、MyD88mRNA水平明显降低（P0.05），两者之间也有差异(P0.05）。结论： 1.证实破血化瘀、填精补髓法可以明显降低脑出血后脑水肿程度，减轻血肿周围损伤脑组织的炎症反应，改善神经功能缺损程度。 2.脑出血后血肿周围脑组织中IL-1、IL-6与TNF-的表达增多，受损脑组织细胞形态的病理变化与其密切相关，破血化瘀、填精补髓法可以抑制IL-1、IL-6与TNF-的表达，对抗脑出血后的炎症反应。 3. NF-κB、TLR4、MyD88可在脑出血后血肿周围受损脑组织中表达增多，破血化瘀、填精补髓法治疗ICH的机制可能是调节NF-κB-TLR4-MyD88信号通路抑制炎症反应和细胞凋亡而达到“解毒”目的，并且治疗由“毒损所致”的髓虚，既针对“诸毒”之标，又兼顾“髓虚”之本而发挥治疗脑出血作用。
【图文】：

出血性中风,方剂,含量影响,脑组织

有显著性差异（P<0.05）。如图2-1 所示。结果提示出血性中风方剂对脑出血的治疗可通过降低 IL-1 水平发挥作用。图 2-1 出血性中风方剂对脑出血大鼠脑组织 IL-1 含量影响3.2 出血性中风方剂对脑出血大鼠脑组织 IL-6 含量影响在本实验中，测得假手术组脑组织局部炎性因子 IL-6 水平为（28.35 3.484）pg/ml，模型组 IL-6 水平为（35.4 5.517）pg/ml，方剂组和对照组含量分别为（22.58 1.96）pg/ml、（15.34 2.65）pg/ml。如表 2-2 所示。

出血性中风,方剂,脑组织,含量影响

有显著性差异（P<0.05），方剂组降低 IL-6 能力与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）。如图2-2 所示。结果提示出血性中风方剂可降低脑出血模型脑组织局部 IL-6 水平，，降低效果优于对照组。图 2-2 出血性中风方剂对脑出血大鼠脑组织 IL-6 含量影响3.3 出血性中风方剂对脑出血大鼠脑组织 TNF- 含量影响在本实验中，测得假手术组脑组织局部炎性因子 TNF- 水平为（59.22 12.55）ng/L，模型组 TNF- 水平为（84.06 16.45）ng/L，方剂组和对照组含量分别为（62 5.74）ng/L、（57.45 6.15）ng/L。如表 2-3 所示。
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R277.7;R-332

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