空肠弯曲菌galE基因变异株的临床意义研究

发布时间：2020-03-29 03:34

【摘要】： 目的：研究鉴定galE基因敲除后空肠弯曲菌变异株脂寡糖结构及抗原性的改变。方法：对galE变异株及其亲代株CJ（CJ HB9313，HS:19型）进行如下实验：①热酚水法分别提取两菌株脂寡糖（Lipo-oligosaccharide，LOS）；②以亲代株的LOS 为抗原，全身免疫新西兰白兔制备抗LOS血清；③选用Tricine- SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳系统，对亲代株和galE基因变异株的LOS电泳分离，分别对其凝胶银染、免疫印迹（兔抗血清为第一抗体，HRP标记的羊抗兔IgG为二抗）及霍乱毒素配体印迹检查（HRP标记的霍乱毒素B亚单位为神经节苷脂GM1的特异性配体）。结果：①galE变异株的LOS电泳迁移较亲代株快速，前者分子量约为4.5kDa，后者约5.5kDa，提示galE变异株的 LOS分子有部分丧失。②亲代株的LOS可与兔抗血清特异性结合，galE变异株LOS则丧失此结合能力，进一步证明galE变异株LOS的部分抗原结构缺失。③亲代株LOS可与特异性配体CTB（霍乱毒素B亚单位）结合显色，说明存在神经节苷脂GM1样结构（位于LOS外核糖基），而galE变 WP=9 异株的LOS不能与CTB结合，表明变异株LOS缺失的正是外核部分糖基，故结合在外核上的GM1等神经节苷脂模拟结构也均缺失。结论：galE变异株丧失了脂寡糖外核糖基及其神经节苷脂GM1样结构，从而改变LOS的抗原性和对周围神经免疫致病力，，并因此可能成为CJ安全减毒活菌苗的候选菌株。
【图文】：

神经节苷脂,唾液酸

Gal（半乳糖），NeuNAc（唾液酸），GalNAc（N-乙酰半乳糖），Glu（葡萄糖），Ceramid（神经酰胺）图 1. 常见神经节苷脂分子结构示意图因一些毒素或外源凝集素能特异性识别寡糖表位，常用来检测神经系统中神经节苷脂存在的部位及密度[2]。如霍乱毒素是GM1特异性配体，对其表位有高特异性亲和力，已在Ranvier结及Schwann细胞上检测到GM1；花生凝集素与asialo -GM1（脱唾液酸GM1）有高度亲和力，在Ranvier检测它的存在；破伤风毒素可特异结合含双唾液酸的神经结苷脂（如GT1b和GD1b），在周围神经Ranvier结及轴索检测到GT1b和GD1b存在。GBS与神经节苷脂抗体已有大量资料显示GBS病人血清中存在多种神经节苷脂抗体，并发现不同的抗神经节苷脂抗体与不同类型的GBS相关。这些抗体在GBS发病中的作用已引起广泛关注。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R378

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