免疫效应分子的定量检测对移植肾急性排斥诊断价值的实验研究

发布时间：2020-04-09 11:19

【摘要】：为探讨免疫效应分子基因的表达与移植肾急性排斥的关系，本研究采用竞争 性PCR的方法定量检测Fas、FasL、GB、P和T1A－1mRNA水平。为此设计一 多特异性竞争性内参照模板，这一模板包含上述5种基因和β－actin基因特异性 引物的 5’和 3’序列，克隆在载体PKF_3上。首先检测移植肾组织免疫效应分子基 因的表达，42例标本分为急性排斥（14例）、慢性排斥（15例）和无排斥（13 例）三组。梯度稀释的竞争性内参照分别与一定量逆转录产物共同扩增，琼脂糖 凝胶电泳检测，比较两种PCR产物的积分吸光度A，判断初始加入的靶cDNA 量。结果显示各组Fas表达相似；急性排斥组FasL、GB、P和T1A－1水平明显 高于慢性排斥组和无排斥组，慢性排斥组和无排斥组间多无显著差异；急性排斥 标本基因表达与病理损害严重程度有关。表明多数基因转录物的增加与移植肾急 性排斥密切相关，综合判断可大大提高急性排斥诊断的准确性。进一步，分离肾 移植患者外周血淋巴细胞，RT－PCR定量，观察除Fas外的四种免疫效应分子 mRNA水平变化，发现其表达模式与移植肾组织的检测结果接近，而采集外周 血既方便，又对移植肾无创伤。在此基础上，通过系列标本的测定，证明移植前 后外周血淋巴细胞基因表达出现一定程度的上调，急性排斥前逐渐升高，至抗排 斥治疗时达峰值，用药后迅速下降，且基因表达的变化早于移植肾形态学改变和 肾功能减退的出现。最后，采用免疫组化技术检测移植肾组织5种免疫效应分子 基因表达产物，，阳性着色主要位于肾小管上皮细胞和间质浸润细胞。急性排斥组 表达明显强于慢性和无排斥组（Fas例外），病理损害严重者，阳性强度亦高， 从而在蛋白质水平上验证了移植肾组织和外周血淋巴细胞基因水平的检测结果。 本研究表明，CTL活化是移植肾急性排斥的重要特征，其活化标志物──FasL、 TIA－1、GB和P四种免疫效应分子在mRNA水平上的表达反映了CTL介导的靶 细胞损害，基因的上调与急性排斥密切相关。我们的工作为建立一系列特异、无 创伤、极早期的急性排斥诊断方法和免疫状态的监视途径奠定了基础。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R699.2;R392.4

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本文编号：2620686