GPS2影响丙型肝炎病毒复制的分子机制研究

发布时间：2020-05-06 23:10

【摘要】：丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)在全球范围内感染约1.7亿人,每年新发HCV感染病例约3.5万例。HCV感染不仅可以引起急性和慢性肝炎,而且还可能发展成为肝硬化和肝癌等,对感染者的健康和生命危害极大。目前针对慢性丙型肝炎的治疗手段非常有限,而且不具备广谱性。因此,深入研究HCV在体内的复制与传播的分子机制以提供更加有效的治疗手段势在必行。 HCV是单链正义RNA病毒,属于黄病毒科。它的基因组编码一个约3000个氨基酸的多聚蛋白前体,该多聚蛋白在细胞以及病毒自身蛋白酶的作用下形成成熟的结构蛋白(Core、E1和E2)以及非结构蛋白(p7、NS2、NS3、NS4A、 NS4B、NS5A和NS5B)。其中NS5A是HCV复制和组装的关键蛋白,不具备蛋白酶活性,其N端含有一个负责膜锚定的α螺旋。它在细胞中以多种磷酸化的形式存在,可与大量的宿主蛋白相互作用,比如FK506-binding protein8(FKBP8)和vesicle-associated membrane protein-associated protein A (VAP-A,也称作hVAP-33),从而影响细胞的多种正常生理功能,包括细胞的生长、增殖以及免疫反应等。 有研究人员以HCV的各个蛋白作为诱饵,在人类cDNA文库中高通量筛选与其相互作用蛋白,发现GPS2(G protein pathway suppressor2)能与HCV NS5A蛋白相互作用。GPS2在多种组织细胞中均有表达,GPS2蛋白在细胞质和细胞核中均有定位,细胞核中的GPS2蛋白能够与某些转录调控因子如细胞核受体共抑制复合物(NCoR/SMRT)相互作用,从而调控基因的表达。有研究发现,定位于细胞质中的GPS2蛋白能够调控促炎症因子TNF-α的信号转导通路。关于GPS2蛋白与HCV复制间的关系尚未见报道。我们首先在过量表达和生理感染HCV的系统中,通过免疫共沉淀实验验证了GPS2蛋白与HCV NS5A蛋白之间的相互作用。然后我们构建了GPS2和NS5A的各个结构域的截短突变体表达载体,通过过表达的免疫共沉淀实验发现NS5A的结构域Ⅰ以及GPS2的coiled-coil结构域为两者相互作用所必需。在此基础上,我们又构建了GPS2的knockdown表达载体,利用逆转录病毒包装的RNA干扰实验,发现GPS2在HCV的复制过程中起到非常重要的作用,是HCV复制不可缺少的一个功能蛋白。进一步的研究发现,GPS2对于NS5A招募宿主因子VAP-A是必需的。已有的研究表明,NS5A与VAP-A间的相互作用对于HCV病毒复制复合体的形成以及病毒的复制至关重要。我们发现,在细胞中过量表达GPS2可以显著增强NS5A与VAP-A之间的相互作用,而下调细胞内GPS2的表达则会破坏两者间的相互作用。这表明GPS2很可能是NS5A与VAP-A之间相互作用的“桥梁”,促进NS5A招募VAP-A,从而利于病毒的复制。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.21

【共引文献】

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本文编号：2652017