胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-1相关研究

发布时间：2020-05-08 08:59

【摘要】：胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1 IGF-1),胰岛素样生长因子结合蛋白-1(Insulin-like growth factor binding protein-1 IGFBP-1)是有重要功能的蛋白质因子。它们具有相互作用,目前已知这种相互作用可以调节游离IGF-1含量、改变其分布,进而对生长发育、肿瘤发生发展、糖代谢等产生影响,但这些作用机制尚不十分清楚。此外,IGF-1具有胰岛素样作用,但因种种原因阻碍其在糖尿病治疗中的应用。我们根据分子生物学、生物信息学理论,采用基因重组表达、酵母三杂交等技术对影响IGF-1、IGFBP-1作用过程中的蛋白质因子进行筛选,构建IGF-1突变体并对其进行了系列研究。全文共分两个部分: 一、IGF-1基因克隆和突变体构建、表达及功能研究 采用PCR方法,从人胎肝cDNA文库中成功钓取了IGF-1基因,并根据生物信息学理论结合文献报道构建了两个IGF-1突变体——IGF97、IGF191。利用pGEX-4T-1构建了IGF-1、IGF97、IGF191原核表达载体,在大肠杆菌中实现了突变体融合表达,采用亲和层析法和凝血酶切割分离获得重组IGF97、IGF191蛋白。采用pcDNA3.1构建了真核表达载体,实现了IGF-1、IGF97、IGF191在COS-7细胞实现表达;观察了纯化的突变体IGF97、IGF191和纯品IGF-1对内皮细胞ECV304增殖的影响,并将构建的真核表达质粒转染内皮细胞ECV304后观察细胞增殖情况,结果显示IGF-1、IGF97对细胞具有同样的促增殖作用,而IGF191促增殖作用明显低于IGF-1。还采用鸡胚尿囊膜血管观察技术在体观察了IGF-1、IGF97、IGF191对新生血管形成的影响,结果显示:IGF-1、IGF97具有促血管新生作用,而IGF191明显弱于IGF-1,综上结果提示突变体IGF191促组织细胞生长作用明显减弱。 二、影响IGF-1、IGFBP-1相互作用蛋白的研究 酵母三杂交是近年发展出来的研究三个蛋白质间相互作用的新技术。我们采用CLONTECH公司酵母三杂交技术对IGF-1、IGFBP-1进行了研究。
【图文】：

1、PCR结果:理论上应为21oPb，电泳结果符合设想，见图1。2、构建的pT一GIF一1质粒鉴定:EcRoIS/al工酶切鉴定，理论上应切下24Obp片段，从电泳结果看也符合理论值。见图2图l从胎肝cDNA文库中钓取工GF一1基因图2构建的pT一GIF一1酶切鉴定

体IGF97、IGF19z，并分别插入pGEM一T载体上，鉴定。2、结果:EocR工/Sall酶切鉴定，，应切下220士bp片段，电泳结果符合预期值(见图3)。pT一GIF97、pT一GIF191经测序，结果符合预期要求。图3突变体pT一工GF97、pT江GF191酶切鉴定电泳图
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R346

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 魏平;胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);2002年05期

2 强新,李红梅,于s

本文编号：2654437