EB病毒感染胃上皮AGS细胞的比较蛋白质组学研究

发布时间：2020-05-09 17:37

【摘要】：EB病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)是一种致瘤病毒,已证明多种人类恶性肿瘤如Burkitt's淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌和胃癌等与EBV感染相关。EBV感染能导致一系列的细胞效应,尤其是宿主细胞蛋白质合成途径在病毒侵入后出现明显变化。因此,在EBV感染和未感染细胞之间就出现了蛋白表达谱的差异,而这些差异蛋白正是病毒感染细胞、细胞抵御病毒的具体执行者,寻找并鉴定这些蛋白将对认识EBV感染机制提供大量的研究线索。本研究运用比较蛋白组技术对EBV感染胃上皮AGS细胞前后出现的差异表达蛋白进行分析,初步探索病毒—宿主相互作用,对于进一步阐明EBV的感染机制及EBV在胃癌发生发展中可能的作用和机制具有十分重要的意义。本论文由三部分组成：第一章前言概述了EB病毒感染与胃癌的相关性,以及比较蛋白质组学在病毒学的研究现状。本课题将比较蛋白质组学与病毒学相结合,并提出本课题的研究方向。第二章EB病毒感染的胃上皮AGS细胞系的建立,培养及鉴定：采用cell-to-cell感染法建立EB病毒感染的胃上皮AGS细胞系,并通过原位杂交及电子显微镜对EB病毒感染的胃上皮AGS细胞系进行验证性检测。原位杂交和电镜实验结果表明：在EB病毒感染的胃上皮AGS细胞的细胞核内均可检测到EBV EBER-1的表达；在EB病毒感染的胃上皮AGS细胞的胞浆内存在明确的EB病毒颗粒。第三章EB病毒感染AGS的比较蛋白质组学分析为了分析感染病毒后宿主细胞蛋白表达谱的变化,本研究利用蛋白质组学技术对EBV感染和未感染的AGS细胞进行了比较蛋白质组学分析。结果显示,在EBV感染AGS细胞后共有11个蛋白点的表达水平发生了至少2.0倍的上调或下调变化。在这些差异表达蛋白中,我们用质谱(MALDI-TOF和LC-ESI-IT MS)成功鉴定出9种蛋白质,对应于5个上调表达和4个下调表达蛋白质。5个上调表达蛋白质是：热休克同源71kDa蛋白(heat shock cognate71kDa protein),细胞质肌动蛋白-1(actin cytoplasmic1),吡多辛-5-磷酸盐氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase9), T复合物蛋白1亚单位α[(t-complex protein1subunit alpha);4个下调表达蛋白是：锌指蛋白-2(zinc finger protein2),细胞周期素依赖性激酶-2(cyclin-dependent kinase2),巨噬细胞加帽蛋白(macrophage capping protein),生长分化因子-11(growth/differentiation factor11)。为了检验蛋白质组研究结果,我们选取细胞周期素依赖性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9进行了Western-Blot验证。结果显示：细胞周期素依赖性激酶-2在EBV感染的胃上皮AGS细胞组中下调表达；同时,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染的胃上皮AGS细胞组中上调表达。这些结果表明两种蛋白的变化趋势与双向凝胶电泳中两种蛋白点变化趋势一致,进一步证明了本研究的蛋白组学结果正确。在我们所发现的差异蛋白中,下调表达的细胞周期素依赖性激酶-2是细胞周期中的重要调控因子之一,我们推测：EBV可能通过改变细胞周期调控,引起细胞周期紊乱,而导致细胞恶性增殖。上调表达的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9是细胞凋亡的重要的起始因子。我们推测：EBV感染AGS细胞以后,细胞凋亡的调节可能是宿主细胞对病毒的防御机制之一。综上所述,细胞周期素依赖性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染中可能存在重要作用。其它的蛋白质则有待于进一步研究。本研究结果的这些数据为进一步研究EBV感染的机制和致病机理提供了蛋白质相关基础信息。图8幅,表6个,参考文献103篇。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.9

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