【摘要】： 天然自身抗体(NAA)广泛存在于人和脊椎动物体内，具有多反应性、亲和力低、缔和性广及种属特异性差的特点。抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)是NAA的重要组成部分，以往实验通过杂交瘤技术、免疫亲和层析技术和噬菌体抗体库技术分别获得单克隆AK auto Ab、健康人血清多克隆AK auto Ab和基因工程人AK auto Ab，并对AK auto Ab免疫学特性及在体生理和病理意义进行了广泛的研究，直接或间接地发现AK auto Ab是机体正常免疫调节网络的组成部分，在维护某些生理状态的稳定、清理衰老细胞及代谢产物、调节免疫和抗感染等方面起到重要作用；在某些病理情况下(如银屑病、接触性皮炎等)，体内AK auto Ab的组分和滴度会发生变化，而正常水平的AK auto Ab则有利于限制病情的发展，促进损伤的修复。在经历了长期的生理性自身抗体与病理性自身抗体的产生及调控机制的研究以及自身抗体是“可怕的自身毒素”亦或是“自我识别分子”学术探讨之后，逐渐意识到NAA的免疫自稳态作用在免疫性疾病治疗中的临床意义，进行了丙种球蛋白及多克隆AK auto Ab治疗炎症性皮肤病的尝试，并朝基因工程抗体临床应用方向努力。 第四军医大学博士学位论文 随着各种补体和补体受体选择性缺陷小鼠模型的逐步建立，代表 先天免疫的补体及其受体在后天免疫及自身兔疫中的诸多作用日益 受到人们的关注。 补体受体2型（CRZ；CDZI）是补体C3d蛋白的受体，同时也是 EB病毒（EBV）膜糖蛋白gp350汉20、CD23和WNJ的受体。 EBVgp350与CRZ的天然配体C3dg选择结合CRZ上的相同位点，其 识别的表位位于SCRI和SCRZ。配体与SCR－l和SCR－2结合后， CRZ与细胞膜免疫球蛋白（Inlg）形成“共帽”k Of tho fCCCptor） 结构，并经过＊D19C＊21儿＊81肚u13复合体中＊D19的信号转导以 及不依赖于 CD途径的核仁素（nucleolin）酪氨酸磷酸化激活 B细 胞。现己证实补体的活化以及B细胞表面CRZ的交联在先天和获得 性免疫之间架起了重要的桥梁，表现为 C3与 B细胞 CD ZI的相互作 用有利于启动抗体应答反应，并对初级抗体应答反应有调节作用： CDZI／CD35对于抗体的亲和性成熟具有重要作用，在抗原浓度低的 情况下，对于活化 B细胞是至关重要的，而且 mlgM（ 交联有利 于特异的低亲和性B细胞对T细胞依赖性抗原和T细胞非依赖性抗 原产生免疫应答。在补体研究的某些方面也涉及天然自身抗体的相关 内容，补体系统对产生NAA的B－1（CDS＋） B细胞有阳性选择作用， ＊RI儿肚缺陷的＊企人小鼠腹膜＊m飞细胞群减少：低表达的抗原 需要补体的协同以便同源性B细胞识别，并使B细胞扩增或得到阳 性选择；补体受体的另一作用是把抗原固定于淋巴组织的滤泡树突状 细胞（FDC），而利于抗原的加工和呈递；结合了原始蛋白抗原的 iC3ba3dg降低了受体对抗原的亲和性所决定的细胞活化的阈值，导 致B细胞体细胞突变的较早发生和VDJ重排中的突变频率的增加， 因而在抗体的亲和性成熟过程中发挥重要作用。与SLE患者B细胞 －3－ 第四军医大学博土学位论文 hCRI和 hCRZ表达水平降低相似，SLE MRL／lpr ’J’鼠补体表达进行性 降低并且发生较早，这表明补体系统与病理性免疫应答同样存在密切 联系。 EBV通过与CDZI结合感染人B细胞，并可引起免疫球蛋白ug） 产生，而且主要发生在EBV合成胞膜糖蛋白的溶细胞期，这提示EBV 引起Ig的产生可能是通过蛋白调节途径完成的，但目前还未有相关 研究的报道。现己证实mVPP35O通过与m21结合可诱导B细胞增 殖以及几－6的产生。Daha等研究发现抗m 抗体和PWh一起可以通 过激活m 刺激B细胞产生IgG、IgM和IgA，表明补体系统参与了抗 体产生的调节。 因而对影响人B细胞产生NAA的因素的研究，对于了解体内NAA 的免疫调节网络有重要意义。 我们首先检验了EBV蛋白能否诱导比及相关细胞因子的产生。 采用聚蔗糖－泛影葡胺密度梯度离心法分离人脐带血单个核细胞，卜 亮氨酸甲酯去除法去除单核细胞、NK细胞和细胞毒性T细胞，AET处 理绵羊红细胞的花环形成分离法去除T细胞以收获B细胞。紫外线 （UV）照射使 EBV DNA变性以检验 EBV蛋白的生物活性，以 UV灭活 的EBV刺激培养的B细胞，用流式细胞仪检测培养细胞＊、CD3、CD4 和＊ 的表达，ELISA法检狈培养上清中 Ito hoG和 ItoM，AK auo Ah IQG和IQ＊以及IL一4、IL一6、IL一8、TNF一a。实验结果表明：l、细 胞培养14天时，未检测到T细胞，CDSB细胞占43％；28天时CDS＋B 细胞占47儿2、第18天以后各时间组ig IgG和IgM OD值升高，与 第18天以前各组相比有显著差异（P＜0．05），，热灭活EBV各时间组 IP IPG和IP＊ OD 值无显著变化（P＞0．05）。3、第18天以后各时间 组AK auto Ah I吵 OD值升高，与第18天以前各组相比有显著差异 －4－ 第四军医大学博士学位论文 （P＜0．05
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R392
【共引文献】
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