NF-κB在老年多器官功能不全及异种移植DXR中作用的研究

发布时间：2020-05-22 00:13

【摘要】： 核转录因子(Nuclear factor-κB，NF-κB)是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子，参与机体的炎症反应、免疫反应、细胞增殖与凋亡及其它应激反应。为了研究NF-κB在老年多器官功能不全综合症发病过程中的作用以及寻找临床上可行的防治途径，本文建立了自然衰老的老化小鼠动物模型和酵母多糖诱导的多器官功能不全小鼠模型，利用凝胶阻滞分析(EMSA)和免疫组化方法检测NF-κB的DNA结合活性以及其表达量在上述模型中的变化。结果表明NF-κB的DNA结合活性在老化小鼠的脏器中均显著上升，同时其表达量也有所增加，在心脏、肝脏和肺脏中的上升率分别为17.9％、11.9％、59.4％，以肺部为最高，这与老化小鼠肺脏中的氧化压力最高呈正相关。在多器官功能不全小鼠模型中，NF-κB被激活，其DNA结合活性也较对照有显著性增加。本文还利用2D电泳和质谱技术对老化小鼠肺脏蛋白进行了蛋白质组学的研究，以期明确在老化过程中起作用的关键蛋白及其与NF-κB的关系。结果显示，肺脏的蛋白表达谱与年青小鼠的脏器相比较在11个点上是有变化的。进而对这11个差异蛋白进行肽质量指纹分析并检索相应蛋白，得到3个有意义的蛋白质。综上，我们认为老年多器官功能不全综合症产生的机制之一可能是：在机体衰老过程中，由于机体清除自由基的能力下降，体内自由基的积累超出了机体的调节能力，导致NF-κB的活化并进一步增加自身的表达量，启动与炎症相关基因的表达，使脏器产生炎症反应，启动老年多器官功能不全综合症的发生。利用酵母多糖诱导小鼠发生多器官功能不全的研究也证实了NF-κB的确在其中起重要作用。本文的另一个目的是利用基因转导方法，抑制NF-κB的激活过程，以期为解决异种器官移植过程中的延缓性排斥反应(DXR)。有研究表明，NF-κB转录因子的激活导致血管内皮细胞的活化是DXR发生的关键问题之一。摘要 AZO是一个具有锌指结构的蛋白，它可以通过阻断以NF一KB为核心的信号转导系统而抑制血管内皮细胞的激活，有望成为克服DXR的有效措施。本文向猪血管内皮细胞(Poreine aortic endothelial eells，PAEC)中导入A20 基因，观察基因转导对PAEC内NF一KB活性及细胞表面粘附分子E一选择素表达的影响，探讨解决异种移植中克服DXR的策略。结果表明，AZO的基因转导可以抑制NF一KB的活性并显著降低PAEC表面E一选择素的表达，抑制率高达”.2%。本文还观察了是一个来源于人腺病毒5(Ad5)的EIA基因调控NF一B转录活性的作用。通过显微注射法制作EIA转基因小鼠，在 44只转基因小鼠中有8只的基因组中整合了EIA基因，其中3只的F1代在 mRNA水平上有E IA基因的表达。通过尾静脉向阳性小鼠注射人灭活血清，对照以生理盐水替代，结果显示，EIA转基因小鼠的脏器表面E一选择素的表达量有显著性降低，说明EIA基因转导对抑制异种移植过程中的DXR的发生有肯定的作用。上述研究表明A20基因和EIA基因均可以有效地抑制细胞表面炎症分子E一选择素的表达，说明这两个基因对血管内皮细胞的激活有抑制作用，为解决异种移植过程中延缓性排斥反应探索了可行的途径。
【图文】：

肺脏,转录因子,脏器,小鼠

放射自显影结果显示，在老化小鼠各脏器中(图1.2，，2、4、6)确有NF-KB转录因子与特异的寡核昔酸相结合，在肺脏中的结合活性最高;而在年青小鼠的脏器中则没有激活的NF一KB存在(图1.2，工、3、5)。提示在老化过程中，NF一B可能会启动一些与老化有关的基因，但其中所涉及到的基因目前还不清楚，有待于进一步研究。图12年青小鼠与老化小鼠脏器核蛋白的EMSA结果]、3、5年青小鼠心脏、肝脏和肺脏2、4、6老化小鼠心脏、肝脏和肺脏

电泳图,肺脏,蛋白,小鼠

2.3.3ZD电泳图象分析扫描后的图象利用ImageMasterZDEli七e3.01软件进行分析。得到结果如图2.差异3和表2.3。经比较，年青小鼠与老化小鼠蛋白表达谱在n个点上有显著性。其P工/MW值见表2.3;在2D电泳图上的位置见图2.3。在年青小鼠肺脏中有表达而在老化小鼠肺脏中不表达的蛋白;化小鼠的肺脏中出现而在年青小鼠肺脏中不表达的蛋白。其中ZD一1一ZD一7是ZD一8一ZD一11是在老
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R363

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